Isolatie van CD4⁺ T-cellen en analyse van de circulerende T-folliculaire Helper (cTfh) cel Subsets van 6-kleur met behulp van perifere bloed stroom Cytometry

Aberrant T-folliculaire helper (Tfh) cel activiteit kan worden opgespoord in auto-immune omstandigheden en hun aanwezigheid wordt geassocieerd met klinische resultaten wanneer de communicatie van de lymfeklier in de B-cel non-Hodgkin-lymfoom is geanalyseerd. Deelverzamelingen van circulerende folliculaire T helper cellen (cTfh), de circulerende geheugencompartiment van Tfh cellen in het bloed, ook bij ziekte worden verstoord en daarom vertegenwoordigen potentiële nieuwe voorspellende biomarkers. Perifere bloed gebaseerde testen is gunstig, want het is relatief niet-invasieve en zorgt voor de eenvoudige seriële opvolging. Dit artikel beschrijft een methode voor het isoleren van CD4 T-cellen⁺ van menselijk bloed, en verdere analyse door stroom-cytometry bij het inventariseren van cTfh cellen en moet de mengverhouding van hun verschillende deelverzamelingen (cTfhPD-1^{-/ +/ hi}, cTfh1, 2, 17 en cTfh1/17). Het niveau van deze deelverzamelingen werd vervolgens vergeleken tussen normale onderwerpen en patiënten met lymfoom. We vonden dat de methode robuust genoeg zijn was om betrouwbare resultaten te verkrijgen van routinematig verzamelde materiaal van de patiënt. De techniek die we voor de analyse beschrijven kan gemakkelijk worden aangepast aan de cel Sorteren en downstream toepassingen zoals RT-PCR.