Изоляция CD4⁺ Т-клеток и анализ циркулирующих Т-фолликулярная помощник (cTfh) клеток подмножеств из периферической крови с помощью 6-цвет потока цитометрии

Ненормальная T-фолликулярная активность клеток помощник (ЦГЗ) обнаружен в аутоиммунных условий, и их присутствие ассоциируется с клинических исходов при анализе микроокружения лимфоузлов в B-клеточной неходжкинской лимфомы. Подмножества циркулирующих Т-фолликулярных клеток помощник (cTfh), циркулирующей отсека памяти Tfh клеток в крови, также возмущенных в болезни и поэтому представляют собой потенциальный Роман интеллектуального биомаркеров. Периферической крови ориентированное тестирование выгодно, потому что это относительно неинвазивные и позволяет простой последовательный мониторинг. Эта статья описывает метод для изоляции CD4⁺ Т-клетки из крови человека и дальнейшего анализа подачей cytometry перечислить cTfh клеток и пропорции их различных подмножеств (cTfhPD-1^{-/ +/ Привет}, cTfh1, 2, 17 и cTfh1/17). Уровень этих подмножеств был затем сравнить между обычные предметы и пациентов с лимфомой. Мы обнаружили, что метод был достаточно прочным, чтобы получить надежные результаты регулярно собранного материала пациента. Техника, которую мы опишем для анализа может быть легко адаптирована для сортировки клеток и нисходящие приложения, такие как RT-PCR.