Isolering av CD4⁺ T-celler och analys av cirkulerande T-follikulär Helper (cTfh) Cell Subsets från perifert blod använder 6-färg flöda flödescytometri

Avvikande T-follikulär helper (Tfh) cellsaktivitet detekteras i autoimmuna tillstånd och deras närvaro är associerade med kliniska resultat när den lymfkörtel närmiljön i B-cells non-Hodgkins lymfom är analyserat. Delmängder av cirkulerande T-follikulär hjälpare celler (cTfh), den cirkulerande minne facket Tfh celler i blodet, är också oroade i sjukdom och därför representerar potentiella nya Prediktiva biomarkörer. Perifert blod-baserad testning är fördelaktigt eftersom det är relativt icke-invasiv och tillåter enkel seriell övervakning. Den här artikeln beskrivs en metod för att isolera CD4⁺ T-celler från humanblod, och vidare analys av flödescytometri att räkna upp cTfh celler och proportionerna av deras olika undergrupper (cTfhPD-1^{-/ +/ hi}, cTfh1, 2, 17 och cTfh1/17). Nivån på dessa grupper jämfördes sedan mellan friska försökspersoner och patienter med lymfom. Vi hittade att metoden var tillräckligt robust för att få tillförlitliga resultat från rutinmässigt insamlade patientmaterial. Den teknik som vi beskriver för analys kan enkelt anpassas till cell sortering och nedströms tillämpningar såsom RT-PCR.