Høj overførselshastighed måling af Dictyostelium discoideum Macropinocytosis af Flow flowcytometri

Store ikke-specifikke væske optagelsen af macropinocytosis er vigtig for spredningen af visse kræftceller, antigen prøveudtagning, vært celle invasion og spredning af neurodegenerative sygdomme. De almindeligt anvendte laboratorium stammer af amoeba Dictyostelium discoideum har ekstremt høje væske optagelse priser når der dyrkes i næringsstof medium, over 90% der er på grund af macropinocytosis. Derudover findes mange af de kendte kernekomponenter af pattedyr macropinocytosis også, hvilket gør det en fremragende modelsystem for at studere macropinocytosis. Her, er den standard teknik til at måle internaliseret væske ved hjælp af fluorescerende dextran som en etiket, der tilpasset en 96-brønd plade format, med prøverne analyseres ved flowcytometri ved hjælp af en høj overførselshastighed prøveudtagning (HTS) vedhæftet fil.

Celler er fodret ikke-quenchable fluorescerende dextran for et forud fastsat tidsrum, vaskes ved nedsænkning i iskold buffer og adskilt ved hjælp af 5 mM natriumazid, som også stopper exocytose. Celler i hver brønd er derefter analyseret ved flowcytometri. Metoden kan også tilpasses måle membran optagelse og fagocytose af fluorescerende perler eller bakterier.

Denne metode var designet til at tillade måling af væske optagelse af Dictyostelium i en høj overførselshastighed, arbejdskraft og ressource effektivt. Det giver mulighed for samtidige sammenligning af flere stammer (f.eks knockout mutanter af et gen) og betingelser (fx celler i forskellige medier eller behandlet med forskellige koncentrationer af inhibitor) parallelt og forenkler tid-kurser.