Bruk av elektron spinn resonans i biologiske prøver omgivelsestemperatur og 77 K

Nøyaktig og bestemt påvisning av reaktive oksygen arter (ROS) i ulike cellular og vev rom er viktig å studere redoks regulert signalering i biologiske innstillinger. Elektron spinn resonans spektroskopi (EPR) er bare direkte metode å vurdere frie radikaler entydig. Dens fordel er at den oppdager fysiologiske nivåer av bestemte arter med en høy spesifisitet, men det krever spesialisert teknologi, forsiktig utvalg forberedelse og egnede kontroller å sikre nøyaktig tolkning av data. Syklisk hydroksylamin spinn sonder reagere selektivt superoxide eller andre radikale generere et nitroxide signal som kan kvantifiseres av EPR spektroskopi. Celle-permeable spinn sonder og spinn sonder utformet for å akkumulere raskt i mitokondrier tillate fastsettelse av superoxide konsentrasjon i forskjellige mobilnettet avdelinger.

I kulturperler celler, bruk av cellen permeable 1-hydroxy-3-methoxycarbonyl-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine (CMH) sammen med og uten celle-ugjennomtrengelig superoxide dismutase (TORV) forbehandling, eller bruk av celle-permeable PEG-TORV, gir den differensiering av ekstracellulære fra cytosolic superoxide. Mitokondrielt 1-hydroxy-4-[2-triphenylphosphonio)-acetamido]-2,2,6,6-tetramethyl-piperidine,1-hydroxy-2,2,6,6-tetramethyl-4-[2-(triphenylphosphonio)acetamido] piperidinium dichloride (mito-TEMPO-H) tillater for måling av Mitokondrielt ROS (hovedsakelig superoxide).

Spin sonder og EPR spektroskopi kan også brukes i vivo modeller. Superoxide kan oppdages ekstracellulære væsker som blodet og alveolar væske, som vev som lungevev. Flere metoder er presentert for å lagre vev for EPR målinger og leverer intravenøs 1-hydroxy-3-carboxy-2,2,5,5-tetramethylpyrrolidine (CPH) spinn sonde i vivo. Mens målinger kan utføres ved romtemperatur, kan prøver innhentet fra i vitro og vivo modeller også lagres ved-80 ° C og analyseres av EPR på 77 K. Eksemplene kan lagres i spesialiserte rør stall ved-80 ° C og kjøre på 77 K å aktivere en praktisk, effektiv, og reproduserbar metode som muliggjør lagring og overføring.