Imunização de alpaca (Lama pacos) com antígenos da proteína e a produção de anticorpos de domínio único antígeno-específicas

Neste manuscrito, um método para a imunização de alpaca e o uso de métodos de biologia molecular para produzir anticorpos antígeno-específicos de domínio único é descrito e demonstrado. Camelídeos, como as alpacas e lhamas, tornaram-se um recurso valioso para a investigação biomédica desde que eles produzem um tipo de romance de anticorpo somente cadeia pesado, que pode ser usado para produzir anticorpos de domínio único. Porque o sistema imunológico é altamente flexível, anticorpos de domínio único podem ser feitos a muitos antígenos diferentes da proteína e até mesmo diferentes conformações do antígeno, com um alto grau de especificidade. Esses recursos, entre outros, fazem anticorpos único domínio uma ferramenta inestimável para a investigação biomédica. Relata-se um método para a produção de anticorpos de domínio único de alpacas. Um protocolo para imunização, coleta de sangue e células B isolamento é descrito. As células-B são utilizadas para a construção de uma biblioteca imunizada, que é usada na seleção de anticorpos específicos de domínio único através de garimpar. Anticorpos de putativo específico único domínio obtidos via panorâmica são confirmados pelo suspenso, ELISA, ou ensaios de gel-turno. Os anticorpos resultantes de domínio único então podem ser usados diretamente ou como parte de um reagente de engenharia. As utilizações de domínio único anticorpo e regentes de domínio único anticorpo-baseado incluem aplicações estruturais, bioquímicas, celulares, in vivo e terapêuticas. Anticorpos de domínio único podem ser produzidos em grandes quantidades, como proteínas recombinantes em sistemas de expressão procarióticos, purificado e usado diretamente ou pode ser projetada para conter marcadores específicos ou tags que podem ser usados como repórteres em estudos celulares ou em diagnósticos.