Abstract
Biology
Adenovirus vektorer är potent verktyg för genetiska vaccination och onkolytisk virotherapy. Men är de benägna att flera oönskade vektor-värd-interaktioner, särskilt efter i vivo leverans. Det är ett samförstånd att de begränsningar som oönskad vektor-värd-interaktioner kan bara övervinnas om definierade ändringar av vektor yta utförs. Dessa ändringar inkluderar avskärmning av partiklarna från oönskade interaktioner och inriktning genom införandet av nya ligander. Målet med det protokoll som presenteras här är att möjliggöra för läsaren att generera skärmade och, om så önskas, riktats mänskliga adenovirus gen överföring vektorer eller onkolytisk virus. Protokollet kommer att ge forskarna möjlighet att ändra ytan av adenovirus vektor förhoppningsvis genom specifika kemiska fastsättning av syntetiska polymerer, kolhydrater, lipider eller andra biologiska eller kemiska beståndsdelarna. Den beskriver den banbrytande tekniken kombinerad genetiska och kemiska kapsid ändringar, som har visat sig underlätta förståelsen och att övervinna hinder för i vivo leverans av adenovirus vektorer. En detaljerad och kommenterade Beskrivning av de avgörande stegen för att utföra specifika kemiska reaktioner med biologiskt aktiva virus eller virus-derived vektorer finns. Den teknik som beskrivs i protokollet är baserat på genetiska införandet av (naturligt frånvarande) cystein rester i lösningsmedel-exponerade slingor av adenovirus-derived vektorer. Dessa cystein rester ger en specifik kemisk reaktivitet kan, efter produktionen av vektorer till höga titrar, utnyttjas för mycket specifika och effektiva kovalent kemisk koppling för molekyler från ett brett utbud av ämnet klasser till vektorn partiklar. Allt kan detta protokoll enkelt anpassas för att utföra ett brett utbud av olika (icke-thiol-baserade) kemiska modifieringar av adenovirus vektor förhoppningsvis. Slutligen är det sannolikt de icke-höljebärande virus-baserat gen överföring vektorerna än adenovirus kan ändras från grunden för detta protokoll.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved