Label-Free Imaging van één eiwitten uitgescheiden door levende cellen via iSCAT microscopie

We tonen de interferometrische verstrooiing (iSCAT) microscopie, een methode voor het opsporen van één labelloze eiwitten uitgescheiden door individuele levende cellen in real time van. In dit protocol behandelen wij de fundamentele stappen voor het realiseren van een iSCAT-Microscoop en aanvullen met extra imaging kanalen om te controleren de levensvatbaarheid van een cel bestudeerde. Na dit gebruiken we de methode voor real-time detectie van enkele eiwitten zoals ze worden uitgescheiden van een levende cel waaruit we met een vereeuwigd B-cel-lijn (Laz388). Nodige maatregelen betreffende de voorbereiding van de Microscoop en monster alsook de analyse van de vastgelegde gegevens worden besproken. Het protocol van de video toont aan dat iSCAT microscopie biedt een eenvoudige methode om te studeren secretie op het niveau van de single-molecuul.