Abstract
Cancer Research
Удивительные клинический успех CD19 химерных антигена рецепторов (автомобиль) Т-клеточной терапии привело к утверждения двух второго поколения химерных антигена рецепторов (легковые автомобили) для острый лимфобластный лейкоз (все) и лимфомы (НХЛ). В центре поля находится теперь на подражать эти успехи в других гемобластозами, где наблюдаются менее впечатляющие темпы полный ответ. Дальнейшее Проектирование автомобилей Т-клетки или совместное управление других методов лечения может успешно преодолеть препятствия для успешного лечения в других настройках рака.
Поэтому мы представляем модель, в которой другие могут провести Доклинические испытания CD19 автомобилей Т-клеток. Результаты в этой хорошо протестированные модели B-клеточной лимфомы склонны быть информативным автомобилей Т-клеточной терапии в целом.
Этот протокол позволяет воспроизводимое производство мыши автомобиля Т-клетки через фосфат кальция трансфекции Plat-E Производитель клеток с MP71 ретровирусной конструкции и pCL Эко упаковка плазмида следуют коллекции секретируемые ретровирусные частицы и трансдукция с использованием рекомбинантного человеческого фибронектин фрагмент и центрифугирования. Проверка ретровирусной трансдукции и подтверждение автомобилей Т-клеток возможность убить целевой Лимфома клетки ex vivo, с помощью проточной цитометрии, luminometry и иммуноферментного анализа (ИФА), также описан.
Описаны lymphodepleted сингенных мышей, с учетом установленных, системного лимфомы и протоколы для тестирования автомобилей Т-клеток в естественных условиях в lymphoreplete. Противораковое действие контролируется биолюминесценции и болезнь прогрессии в естественных условиях . Мы показываем типичные результаты ликвидации установленных B-клеточной лимфомы, при использовании 1st или 2-го поколения автомобили в сочетании с lymphodepleting предварительного кондиционирования и меньшинство мышей, достижение долгосрочной перспективе ремиссии при использовании автомобилей T клетки, выражая Ил-12 lymphoreplete мышей.
Эти протоколы могут быть использованы для оценки CD19 автомобилей Т-клеток с различных дополнительных изменений, комбинации автомобилей Т-клеток и других терапевтических агентов или адаптированы для использования автомобилей Т-клетки против различных целевых антигенов.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved