Medida de alto rendimiento de tiempo de tránsito intestinal utilizando larvas peces cebra

Pez cebra se utilizan como organismos modelo alternativo para pruebas de seguridad de drogas. El tracto gastrointestinal (GI) de pez cebra tiene similitudes genéticas, neuronales y farmacológicas a la de los mamíferos. Intolerancia GI durante ensayos clínicos de medicamentos es común y puede representar una grave amenaza para la salud humana. Pruebas de toxicidad gastrointestinal en modelos preclínicos de mamíferos pueden ser costosos en términos de tiempo, sustancia de ensayo y trabajo. El método de alto rendimiento presentado aquí puede utilizarse para predecir los problemas de seguridad GI. Comparado con modelos mamíferos, este método permite la evaluación más conveniente de prueba compuesto efectos sobre el tránsito GI durante el uso de bajas cantidades de compuesto. En este método, pez cebra larval (7 días post fertilización) son alimentadas con alimentos que contienen una etiqueta fluorescente. Después de la alimentación, cada pez larval es colocado en un pocillo de una placa de 96-cónico-parte inferior-bien y dosificar con sustancia de ensayo (disuelto en agua) o vehículo. Como se produce el tránsito del intestino, materia fecal se acumula en el fondo de los pozos, y la tasa a la cual esto sucede se controla midiendo la fluorescencia del fondo del pozo varias veces con el tiempo usando un espectrofotómetro de placa. La fluorescencia de las larvas en un grupo determinado tratamiento son promedio y se graficaron estos valores junto con el error estándar, para cada tiempo de medición, produciendo una curva que representa el tránsito promedio de alimentos en el tiempo. Efectos en el tiempo de tránsito intestinal se identifican comparando el área bajo la curva para cada grupo de tratamiento a el grupo tratado con vehículo. Este método detecta cambios en el tiempo de tránsito GI pez cebra inducido por fármacos con efectos GI clínicos conocidos; puede ser empleado para interrogar a decenas de tratamientos para efectos GI por día. Como tal, más seguros compuestos pueden rápidamente priorizarse para pruebas de mamíferos, que acelera el avance de 3R de descubrimiento y puedeo.