Kvantitativ Autoradiografisk metode til bestemmelse af de regionale rater for cerebral protein syntese in vivo

Protein syntese er nødvendig for udvikling og vedligeholdelse af neuronal funktion og er involveret i adaptive ændringer i nervesystemet. Desuden menes det, at dysregulering af proteinsyntese i nervesystemet kan være en kerne fænotype i nogle udviklingsmæssige lidelser. Nøjagtig måling af raterne af cerebral proteinsyntese i dyremodeller er vigtig for at forstå disse lidelser. Den metode, vi har udviklet, var designet til at blive anvendt til studiet af vågen, opfører dyr. Det er en kvantitativ autoradiographic metode, så det kan give satser i alle regioner af hjernen samtidig. Metoden er baseret på brugen af en Tracer aminosyre, L-[1-¹⁴C]-leucin, og en kinetisk model af opførsel af L-leucin i hjernen. Vi valgte L-[1-¹⁴C]-leucin som Tracer, fordi det ikke fører til fremmede mærkede metaboliske produkter. Det er enten indarbejdet i protein eller hurtigt metaboliseres til at give ¹⁴co₂ , som er fortyndet i en stor pulje af ikke-mærket Co₂ i hjernen. Metoden og modellen giver også mulighed for bidrag af ikke-mærket leucin afledt af vævs proteolyse til vævs forløberen for proteinsyntese. Metoden har den rumlige opløsning til at bestemme proteinsyntese satser i celle og neuropil lag, samt hypothalamus og kranielle nerve kerner. For at opnå pålidelige og reproducerbare kvantitative data er det vigtigt at overholde proceduremæssige detaljer. Her præsenterer vi de detaljerede procedurer for den kvantitative autoradiographic L-[1-¹⁴C]-leucin metode til bestemmelse af regionale satser for proteinsyntese in vivo.