Afzondering, fixatie en immunofluorescentie beeldvorming van muis bijnieren

Immunofluorescentie is een gevestigde techniek voor de detectie van antigenen in weefsel met de tewerkstelling van fluorescerende-geconjugeerde antilichamen en heeft een breed spectrum van toepassingen. Detectie van antigenen zorgt voor karakterisering en de identificatie van meerdere celtypen. Gelegen boven de nieren en ingekapseld door een laag mesenchymale cellen, is de bijnier een endocriene orgel, gecomponeerd door twee verschillende weefsels met verschillende embryologische oorsprong, de mesonephric tussentijdse mesoderm afkomstige buitenste cortex en de neurale Crest-afgeleide innerlijke medulla. De bijnierschors scheidt steroïden (dat wil zeggen, mineralocorticoids, glucocorticoïden, geslachtshormonen) Overwegende dat de medulla bijnier catecholamines (dat wil zeggen, adrenaline, noradrenaline produceert). Terwijl de bijnier onderzoek, is het belangrijk om te kunnen onderscheiden van unieke cellen met verschillende functies. Hier bieden we een protocol ontwikkeld in ons laboratorium dat een reeks opeenvolgende stappen die nodig zijn beschrijft voor het verkrijgen van de immunofluorescentie kleuring te karakteriseren van de celtypes van de bijnier. Eerst richten we ons op de dissectie van de muis bijnieren, de microscopische verwijdering van vet van periadrenal gevolgd door de fixatie, verwerking en paraffine inbedding van het weefsel. Vervolgens beschrijven we afdelen van het weefsel blokken met een roterende microtoom. Tot slot, we detail een protocol voor immunefluorescentie verkleuring van de bijnieren die we hebben ontwikkeld om te minimaliseren van zowel de niet-specifieke antilichaam binding en de autofluorescence met het oog op een optimale signaal.