Isolasjon, fiksering og Immunofluorescence avbildning av musen binyrene

Immunofluorescence er en veletablert teknikk for påvisning av antigener i vev med ansettelse av fluorochrome-konjugerte antistoffer og har et bredt spekter av programmer. Påvisning av antigener gir karakterisering og identifikasjon av flere celletyper. Ligger ovenfor nyrer og innkapslet av en lag av mesenchymal celler, er binyrene en endokrine organ består av to ulike vev med forskjellige embryologiske opprinnelse, mesonephric mellomliggende mesoderm-avledet ytre cortex og den nevrale kam-avledet indre marg. Binyrebarken utskiller steroider (dvs. mineralkortikoider, glukokortikoider, sex hormoner), mens adrenal medulla produserer katekolaminer (dvs. adrenalin, noradrenalin). Mens drive adrenal forskning, er det viktig å kunne skille unike celler med ulike funksjoner. Her gir vi en protokoll utviklet i vårt laboratorium som beskriver en rekke sekvensielle trinn kreves for å få immunofluorescence flekker som karakteriserer i celletyper av det adrenalin kjortelen. Vi fokusere på Disseksjon av musen binyrene, mikroskopiske fjerning av periadrenal fett etterfulgt av fiksering, behandling og parafin innebygging av vev. Vi beskriver snitting av vev blokker med en roterende mikrotom. Til slutt, detalj vi en protokoll for immunofluorescent farging av binyrene som vi har utviklet for å redusere både ikke-spesifikke antistoffer bindende og autofluorescence for å oppnå en optimal signal.