植物生长与农杆菌介导的植物浸水转化

夏氏叶炎是一种适应各种非生物胁迫的极端植物, 包括多重离子毒性胁迫。尽管有高质量的基因组资源可用于研究植物如何适应环境压力, 但由于缺乏可行的转化系统, 其作为功能基因组学模型和工具的价值受到限制。在这个协议中, 我们报告如何产生稳定的转基因s.类似线使用农杆菌介导的花浸法。我们修改了用于罗非鱼的转化协议, 以考虑到罗非鱼的独特特征, 如不确定的开花习惯和高表观蜡含量的叶子。简单地说, 在种植前,将其在4°c 下分层5天。植物生长在14小时的光和10小时黑暗的光周期和 130μmol m-2-1 的光强, 在 22°c 至24°c。选择了8至9个具有多个花序的周龄植物进行改造。这些花序被浸入携带 mp90rk质粒的农杆菌 gv3101 的浸润溶液中。我们在三到四周的时间间隔内进行了两轮插花, 以提高转化效率。t1 种子在萌发前在容器中收集并干燥四周, 以筛选出候选转化线。对 basta 的抗性被用来筛选 t1 植物。我们在两个为期一周的工厂喷洒了三次基本服务溶液, 间隔为三天, 以减少假阳性。对存活的单个植物进行了基本程度的空投试验, 以确定真正的阳性转化物。转化效率为 0.033, 每繁殖 10, 000 种 t1 种子产生3-4 个转基因植株。