En rensning og In Vitro aktivitet Assay for en (p) ppGpp syntetase fra Clostridium difficile

Kinase og pyrophosphokinase enzymer overføre gamma fosfat eller beta-gamma pyrofosfat gruppe fra nukleotid trifosfat prækursorer til substrater til at oprette fosforyleres produkter. Brugen af γ -³²- P mærket NTP prækursorer tillader samtidig overvågning af substrat udnyttelse og produkt dannelsen af radiografi. Tyndtlagskromatografi (TLC) på cellulose plader giver hurtig adskillelse og følsomme kvantificering af substrat og produkt. Vi præsenterer en metode for at anvende tyndtlagskromatografi for at pyrophosphokinase aktiviteten af en renset (p) ppGpp syntetase-analysen. Denne metode har tidligere været anvendt til at karakterisere aktiviteten af cykliske nukleotid og dinucleotid synthetases og er generelt egnet til karakterisering af aktiviteten af et enzym, der hydrolyserer et nukleotid trifosfat bond eller overfører en terminal fosfat fra fosfat donor til en anden molekyle.