En rensing og I Vitro aktivitet analysen for en (p) ppGpp Synthetase fra Clostridium difficile

Kinase og pyrophosphokinase enzymer overføre gamma-fosfat eller beta-gamma pyrophosphate moiety fra nukleotid trifosfat forløpere til underlag å lage fosforylert produkter. Bruk av γ -³²- P merket NTP forløpere tillater samtidig overvåking av underlaget utnyttelse og produkt dannelsen av røntgenfotograferingen. Tynt lag kromatografi (TLC) på cellulose plater tillater rask separasjon og følsom kvantifisering av underlaget og produkt. Vi presenterer en metode for å utnytte den tynne lag kromatografi å analysen pyrophosphokinase aktiviteten til en renset (p) ppGpp synthetase. Denne metoden har tidligere blitt brukt til å beskrive aktiviteten av syklisk nukleotid og dinucleotide synthetases og er generelt egnet for karakteriserer aktiviteten til et enzym som hydrolyzes en nukleotid trifosfat obligasjon eller overfører en terminal fosfat fra fosfat giver til et annet molekyl.