Una purificación y análisis de actividad In Vitro de una (p) ppGpp sintetasa de Clostridium difficile

Enzimas quinasa y pyrophosphokinase transfieren del fosfato gamma o la molécula de pirofosfato beta-gamma a partir de precursores de nucleótidos trifosfato a sustratos para crear productos fosforilados. El uso de la γ -³²- P etiquetado precursores NTP permite supervisión simultánea de formación de producto y utilización del sustrato por la radiografía. Cromatografía en capa fina (TLC) en las placas de celulosa permite la rápida separación y cuantificación sensible de sustrato y producto. Se presenta un método para la utilización de la cromatografía en capa fina para analizar la actividad pyrophosphokinase de una sintetasa purificada de ppGpp (p). Este método se ha utilizado anteriormente para caracterizar la actividad de sintetasas de nucleótido y dinucleótido cíclicos y es ampliamente conveniente para caracterizar la actividad de cualquier enzima que hidroliza un enlace de nucleótidos trifosfato o transfiere un terminal fosfato a partir de un donante de fosfato a otra molécula.