In Vitro Test per studiare l'aggregazione della proteina Tau e lo Screening di stupefacenti

Aggregazione della proteina tau e la formazione di filamenti elicoidali accoppiati è un marchio di garanzia del morbo di Alzheimer e altre Taupatie. Rispetto ad altre proteine associate a malattie neurodegenerative, la cinetica di aggregazione segnalati in vitro per la proteina tau sono meno coerenti che presenta una variabilità relativamente alta. Qui descriviamo lo sviluppo di un in vitro aggregazione test che simula i passi previsti associati tau misfolding e aggregazione in vivo. L'analisi utilizza l'isoforma più lunga di tau (huTau441) che contiene sia inserti acidi N-terminale, nonché quattro domini di legame dei microtubuli (MBD). L'aggregazione in vitro viene attivato tramite l'aggiunta di eparina e seguita costantemente da Tioflavina T fluorescenza in un formato ben 96 micropiastra. Il dosaggio di aggregazione tau è altamente riproducibile tra diversi pozzi, funzionamenti sperimentali e lotti della proteina. L'aggregazione conduce a tau PHF-come la morfologia che è molto efficiente nella semina la formazione di strutture fibrillari de novo . Oltre alla sua applicazione nello studio del meccanismo di tau misfolding e aggregazione, il dosaggio attuale è un robusto strumento per lo screening di farmaci che potrebbero interferire con la patogenesi di tau.