Vorbereitung der Chloroplasten Sub Fächer von Arabidopsis für die Analyse von Protein-Lokalisierung durch Immunoblotting oder Proteomics

Chloroplasten sind wesentliche Bestandteile der Pflanzenzellen. Diese Plastiden erfüllen viele wichtige Funktionen, wie Assimilation von Kohlenstoff, Schwefel und Stickstoff sowie Synthese von wesentlichen Metaboliten. Diese Organellen bestehen aus den folgenden drei wichtigsten Sub-Fächer. Der Umschlag, gekennzeichnet durch zwei Membranen, umgibt die Organellen und steuert die Kommunikation von Plastiden mit anderen Fächern der Zelle. Das Stroma ist die lösliche Phase der Chloroplasten und der Haupt-Website wo Kohlendioxid in Kohlenhydrate umgewandelt wird. Die Thylakoidmembran Membran ist die innere Membran-Netzwerk bestehend aus Grana (flache komprimierte Sacs) und Lamellen (weniger dichten Strukturen), wo sauerstoffhaltige Photosynthese stattfindet. Dieses Protokoll beschreibt Schritt für Schritt Verfahren für die Reinigung, mit differenzierten Centrifugations und Percoll Gradienten, der intakten Chloroplasten aus Arabidopsisund deren Fraktionierung, mit Saccharose Steigungen, in drei Sub-Fächer (z. B. Umschlag, Stroma und Thylakoids). Dieses Protokoll beschreibt auch, wie die Reinheit dieser Fraktionen mit Marker, die auf die verschiedenen Chloroplasten Sub Fächer zu bewerten. Die hier beschriebene Methode ist wertvoll für die Lokalisierung der Subplastidial von Proteinen mit Immunoblotting, sondern auch für subzellulären und Subplastidial Proteomics und andere Studien.