Beredning av kloroplast sub fack från Arabidopsis för analys av Protein lokalisering av Immunoblotting eller proteomik

Kloroplaster är viktiga komponenter i växtceller. Sådan plastids uppfylla många avgörande funktioner, såsom assimilering av kol, svavel och kväve samt syntes av viktiga metaboliter. Dessa organeller består av de följande tre viktiga sub fack. Kuvertet, kännetecknas av två membran, omger organell och kontroller av meddelande av plastid med andra cell-fack. Stroma är lösliga fasen av kloroplast och den viktigaste platsen där koldioxid omvandlas till kolhydrater. Tylakoida membranet är den inre membran nätverk bestående av grana (platt komprimerade SBO) och lamellerna (mindre täta strukturer), där syrerik fotosyntesen tar plats. Protokolls beskriver steg för steg förfaranden som krävs för rening, med hjälp av differentiell centrifugations och Percoll lutningar, av intakt kloroplaster från Arabidopsisoch deras fraktionering, använder sackaros lutningar, i tre sub fack (dvs. kuvert, stroma och thylakoids). Detta protokoll innehåller också instruktioner om hur man bedömer renheten av dessa fraktioner med hjälp av markörer associerade till olika kloroplast sub facken. Den metod som beskrivs här är värdefullt för subplastidial lokalisering av proteiner med immunoblotting, men också för subcellulär och subplastidial Proteomik och andra studier.