センサー蛍光蛋白質生きているセルおよびバルク量を定量化する方法

光活性化・転換蛍光タンパク質 (PA FPs) は、細胞やタンパク質のアンサンブルのダイナミクスを分析するため生細胞の蛍光顕微鏡に使用されています。これまでのところ、方法がない一括で定量化されているし、ライブで PA FPs の数を表明した細胞が蛍光を発するにセンサー。

ここでは、内部の支配者を含むプロトコルを提案する、すなわち、遺伝子 ratiometrically に異なるスペクトル (活性型) 蛍光蛋白質を結合するをオンにセルで表されるすべての PA-FPs の割合を数値化蛍光。Photoactivation の異なるモードが異なる光効率を得られたことを示すこのプロトコルを使用して、.共焦点レーザー走査顕微鏡 (CLSM) で短いハイパワー光と CLSM で適用される低レベルの曝露や広視野照明によって適用される短パルスの数百人よりも 4 倍低い光効率までなりました。プロトコルは GFP (PA-) と (PA-) 桜のここで例示していて、間それ原則的に適用できます任意のスペクトルの異なる活性型または蛍光蛍光タンパク質ペアとすべての実験の設定。