Påvisning av en sirkulerende MicroRNA tilpasset Panel hos pasienter med metastatisk tykktarmskreft

Det er økende interesse i flytende biopsi for kreftdiagnose, prognose og terapeutiske overvåking, opprette behovet for pålitelig og nyttig biomarkers for klinisk praksis. Her presenterer vi en protokoll trekke ut revers transkribere og evaluere uttrykk nivåene av sirkulerende miRNAs fra plasmaprøver av pasienter med tykktarmskreft (CRC). microRNAs (miRNAs) er en klasse av ikke-koding RNAs av 18-25 nukleotider i lengde som regulerer uttrykket av målet gener på translasjonsforskning nivå og spiller en viktig rolle, inkludert pro - og anti-angiogenic funksjon, i physiopathology av ulike organer. miRNAs er stabile i biologiske væsker som serum og plasma, som gjør dem ideelle sirkulerende biomarkers for kreft diagnose, prognose og behandling beslutningstaking og overvåking. Sirkulerende miRNA utvinning ble utført med en rask og effektiv metode som involverer både organisk og kolonne-baserte metoder. For miRNA retrotranscription brukte vi en flertrinns prosedyre som vurderer polyadenylation på 3 og ligation av et kort på 5' av det eldre miRNAs, etterfulgt av tilfeldige miRNA pre forsterkning. Vi valgte et 24-miRNA egendefinerte panel å bli testet av kvantitative sanntids polymerasekjedereaksjons (qRT-PCR) og oppdaget miRNA sonder på matrisen egendefinerte plater. Vi utførte qRT PCR plate kjører på en sanntids PCR-System. Rengjøring miRNAs for normalisering ble valgt med GeNorm programvare (v. 3.2). Dataene ble analysert bruker uttrykket suite programvare (v 1.1) og statistiske analyser ble utført. Metoden viste seg for å være pålitelige og teknisk robust og kan være nyttig å vurdere biomarkør nivåer i flytende prøver som plasma og/eller serum.