Abstract
Biochemistry
Extracellulära blåsor (EVs) kan släppas från många olika celltyper och detekteras i de flesta, om inte alla, kroppsvätskor. EVs kan delta i cell-till-cellkommunikation genom shuttling bioaktiva molekyler såsom RNA eller protein från en cell till en annan. De flesta studier av EVs har utförts i cellkultur modeller eller i EVs isolerade från kroppsvätskor. Det finns ett växande intresse för isolering av EVs från vävnader för att studera deras bidrag till fysiologiska processer och hur de förändras i sjukdom. Isoleringen av EVs med tillräcklig avkastning från vävnader är tekniskt utmanande på grund av behovet av vävnads dissociation utan cellulära skador. Denna metod beskriver ett förfarande för isolering av EVs från mus levervävnad. Metoden omfattar en tvåstegsprocess som inleds med in situ -kollagenasnedbrytning följt av differential Ultra-centrifugering. Vävnad perfusion med hjälp av kollagenase ger en fördel framför mekanisk skärning eller homogenisering av levervävnad på grund av dess ökade avkastningen av erhållna EVs. Användningen av denna tvåstegsprocess för att isolera EVs från levern kommer att vara användbart för studier av vävnad EVs.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved