الجيش الملكي النيبالي على إعادة برمجة الليفية الأولية البشرية داخل الخلايا الجذعية المستحثة Pluripotent

وأثبتت الخلايا الجذعية المستحثة pluripotent (إيبسكس) لتكون أداة قيمة لدراسة التنمية البشرية والمرض. يتطلب مواصلة النهوض إيبسكس التجدد العلاجية آمنة، قوية، وبروتوكول إعادة برمجة المناسب. نقدم هنا، بروتوكول ذات الصلة سريرياً، خطوة بخطوة للغاية ذات الكفاءة العالية إعادة برمجة الخلايا الليفية الجلد البشري في إيبسكس باستخدام نهج غير دمج. يتكون جوهر البروتوكول للتعبير عن العوامل بلوريبوتينسي (SOX2، KLF4، كميك، LIN28A، نانوج، OCT4-دخولها الانصهار) من في المختبر الكشف رسول يدون توليفها مع تعديل النيوكليوتيدات (مرناس المعدلة). هي transfected مرناس تعديل إعادة برمجة في الخلايا الليفية الأولية كل 48 ساعة إلى جانب ناضجة يقلد microRNA-367/302 الخاصة بالخلايا الجذعية الجنينية لمدة أسبوعين. المستعمرات اللجنة التوجيهية الناتجة يمكن ثم عزل وتوسيع مباشرة في ظروف خالية من علبة التغذية بالورق. لتحقيق أقصى قدر من الكفاءة والاتساق لدينا بروتوكول إعادة برمجة عبر عينات تنتجها الخلايا الليفية، ونحن قد الأمثل المعلمات المختلفة بما في ذلك نظام تعداء الجيش الملكي النيبالي، توقيت ترانسفيكتيونس وشروط الثقافة وكثافة البذر. الأهم من ذلك، يولد لدينا أسلوب إيبسكس عالية الجودة من معظم المصادر تنتجها الخلايا الليفية، بما في ذلك عينات لإعادة برمجة المريضة، الذين تتراوح أعمارهم بين، و/أو مسن.