هذا العمل كان تدعمها "خدمة الصحة العامة في الولايات المتحدة" منح AI103806 من "المعاهد الوطنية للصحة".

جميع الحيوانات الحفاظ عليها والتعامل معها العناية القصوى لتقليل عدم الراحة أثناء سير الإجراءات. الإجراء إجراء امتثالا لرعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة وجميع القوانين الاتحادية والولائية والمحلية. أيضا ملاحظة أن التجارب المختبرية التي تجري وفقا للمبادئ التوجيهية للسلامة البيول...

<ol>
	<li>Radoshevich, L., Cossart, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes:+towards+a+complete+picture+of+its+physiology+and+pathogenesis.">Listeria monocytogenes: towards a complete picture of its physiology and pathogenesis.</a> Nature Reviews Microbiology. 16 (1), 32-46 (2018).</li><li>de Noordhout, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+listeriosis:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">The global burden of listeriosis: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Infectious Diseases. 14 (11), 1073-1082 (2014).</li><li>Drevets, D. A., Leenen, P. J., Greenfield, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+the+central+nervous+system+by+intracellular+bacteria.">Invasion of the central nervous system by intracellular bacteria.</a> Clinical Microbiology Reviews. 17 (2), 323-347 (2004).</li><li>Huang, S. H., Stins, M. F., Kim, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+penetration+across+the+blood-brain+barrier+during+the+development+of+neonatal+meningitis.">Bacterial penetration across the blood-brain barrier during the development of neonatal meningitis.</a> Microbes and Infection. 2 (10), 1237-1244 (2000).</li><li>Brouwer, M. C., Tunkel, A. R., van de Beek, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+diagnosis,+and+antimicrobial+treatment+of+acute+bacterial+meningitis.">Epidemiology, diagnosis, and antimicrobial treatment of acute bacterial meningitis.</a> Clinical Microbiology Reviews. 23 (3), 467-492 (2010).</li><li>Thigpen, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+meningitis+in+the+United+States,+1998-2007.">Bacterial meningitis in the United States, 1998-2007.</a> New England Journal of Medicine. 364 (21), 2016-2025 (2011).</li><li>Durand, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+bacterial+meningitis+in+adults.+A+review+of+493+episodes.">Acute bacterial meningitis in adults. A review of 493 episodes.</a> The New England Journal of Medicine. 328 (1), 21-28 (1993).</li><li>Disson, O., Lecuit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+the+central+nervous+system+by+Listeria+monocytogenes.">Targeting of the central nervous system by Listeria monocytogenes.</a> Virulence. 3 (2), 213-221 (2012).</li><li>Daneman, R., Prat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-brain+barrier.">The blood-brain barrier.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (1), a020412 (2015).</li><li>Becavin, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+widely+used+Listeria+monocytogenes+strains+EGD,+10403S,+and+EGD-e+highlights+genomic+variations+underlying+differences+in+pathogenicity.">Comparison of widely used Listeria monocytogenes strains EGD, 10403S, and EGD-e highlights genomic variations underlying differences in pathogenicity.</a> MBio. 5 (2), e00969-e00914 (2014).</li><li>Kirchner, M., Higgins, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+ROCK+activity+allows+InlF-mediated+invasion+and+increased+virulence+of+Listeria+monocytogenes.">Inhibition of ROCK activity allows InlF-mediated invasion and increased virulence of Listeria monocytogenes.</a> Molecular Microbiology. 68 (3), 749-767 (2008).</li><li>Grubaugh, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VirAB+ABC+transporter+is+required+for+VirR+regulation+of+Listeria+monocytogenes+virulence+and+resistance+to+nisin.">The VirAB ABC transporter is required for VirR regulation of Listeria monocytogenes virulence and resistance to nisin.</a> Infection and Immunity. 86 (3), 901-917 (2018).</li><li>Vazquez-Boland, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+pathogenesis+and+molecular+virulence+determinants.">Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants.</a> Clinical Microbiology Reviews. 14 (3), 584-640 (2001).</li><li>Ghosh, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invasion+of+the+brain+by+Listeria+monocytogenes+is+mediated+by+InlF+and+host+cell+vimentin.">Invasion of the brain by Listeria monocytogenes is mediated by InlF and host cell vimentin.</a> MBio. 9 (1), e00160-e00118 (2018).</li><li>Henke, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+spreads+within+the+brain+by+actin-based+intra-axonal+migration.">Listeria monocytogenes spreads within the brain by actin-based intra-axonal migration.</a> Infection and Immunity. 83 (6), 2409-2419 (2015).</li><li>Maury, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncovering+Listeria+monocytogenes+hypervirulence+by+harnessing+its+biodiversity.">Uncovering Listeria monocytogenes hypervirulence by harnessing its biodiversity.</a> Nature Genetics. 48 (3), 308-313 (2016).</li></ol>

المستوحدة لام غير قادرة على تسبب التهاب السحايا والدماغ مما يهدد حياة البشر. الدراسات السابقة أثبتت قدرة البكتيريا عبر الدم-الدماغ-الجدار (BBB) واستعمار الدماغ. وقد اقترحت ثلاث طرق لغزو الدماغ أثناء الإصابة: مباشرة اختراق BBB بالبكتيريا، والنقل خلسة بواسطة البكتيريا الواردة داخل الخلا?...

هو بكتيريا إيجابية الليستريه المستوحدة ممرض داخل الخلايا اختياري وواحد مسببات معظم القاتل المنقولة بالأغذية في جميع أنحاء العالم. ابتلاع الطعام لام الليستريه الملوثة يمكن أن يؤدي إلى داء الليستَريات في البشر، وهو مرض الغازية شديدة تستهدف معظم الحوامل، والأطفال حديثي الولادة، والأفراد المسنين، والمناعة1. لام الليستريه من بين الأسباب الرئيسية للوفاة بالممرضات المنقولة بالأغذية في الولايات المتحدة، ومعدلات الوفاة من داء الليستَريات يصل إلى 20-30 ٪، أعلى لجميع مسببات الأمراض التي تنقلها الأغذية2. حاليا لا يوجد لقاح لام الليستريه وقدرة البكتيريا على فعالية وامتدت إلى الأجهزة البعيدة والدماغ بعبور حاجز الدم في الدماغ (BBB) قد تؤدي إلى التهاب السحايا مهددة للحياة واستعمار الدماغ3 , 4 , 5 , 6-التهاب السحايا الجرثومي عادة شديدة؛ الإصابات أثناء استرداد معظم الناس الذين يتلقون العلاج، يمكن أن يسبب مضاعفات خطيرة مثل، وتلف الدماغ، وفقدان السمع أو إعاقات التعلم في الأطفال. ومن المتوقع لام الليستريه لحساب 10 في المائة على الأقل من كل المجتمع اكتسب التهاب السحايا في الولايات المتحدة7.
طريقا رئيسيا لنشر البكتيريا إلى الدماغ والسحايا من خلال مجرى الدم. البكتيريا المتداولة في الأوعية الدموية في الدماغ قادرة على عبور BBB يسبب التهاب الدماغ. بي بي بي هو نظام حاجز vascularized العالية التي تحمي الدماغ من الجسيمات الأجنبية المتداولة في الدم. خلايا بطانية تشكل طبقة خطوط سطح الداخلية ل الأوعية الدموية8،9. وبالإضافة إلى لام الليستريه، مسببات الأمراض البكتيرية متعددة مثل وجود النيسرية السحائية، العقدية الرئوية، الإشريكيّة القولونية، و النزلة النزفية من النوع باء (Hib) قادرون على استعمار الدماغ بعبور ال بي بي بي3،4،،من56. ومع ذلك، عند دراسة أعباء البكتيرية في دماغ الفئران المصابة، من المهم لتحديد ما إذا كانت البكتيريا عبروا BBB، خلاف ذلك عبء البكتيرية في الدماغ قد تمثل البكتيريا التي لا تزال في الأوعية الدموية للمخ. وبالتالي، من الضروري أن نتخلل الفئران من كل الدم قبل تحديد الوحدات المكونة للمستعمرة (زيمبابوي) من هوموجيناتيس الدماغ.
في هذه الدراسة، يصف لنا في فيفو أساليب دراسة العدوى الليستريه لام المخ. للأساليب الموصوفة هنا، استخدمنا لام الليستريه سلالة 10403S. المستوحدة ل. 10403S واحد من سلالات المختبر الأكثر استخداماً لدراسة داء الليستَريات النظمية في طراز الماوس من عدوى10. ويستند هذا البروتوكول الحقن القياسية لام الليستريه يليه نضح الفئران. ويرد في الشكل 1ملخص تخطيطي البروتوكول العدوى في الفئران. لام الليستريه-جمعت العقول المصابة والأجهزة الأخرى من الفئران غير perfused أو perfused وتحديد عبء الجهاز الجرثومي. هذه الأساليب هي مفيدة ليس فقط تحديد مجموع استعمار الدماغ في الحيوانات المصابة بالعدوى البكتيرية، ولكن هي أيضا مفيدة لتحديد ما إذا كانت البكتيريا قد تغلغلت في بي بي بي في فيفو التوسط من أجل غزو الدماغ. من المهم تسليط الضوء على أنه ينبغي أن تجري هذا البروتوكول المختبر بعد التشاور مع إدارة مرفق اللجنة والحيوان في السلامة المؤسسية ذات الصلة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:665px;" width="665">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:261px;">Brain Heart Infusion media</td>
			<td style="width:119px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:119px;">237200</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streptomycin sulfate&#160;</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>0382-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Petri dishes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:261px;">IKA T18 ULTRA-TURRAX Basic Homogenizer</td>
			<td>IKA</td>
			<td>3352109</td>
			<td>Model: T18BS1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>DU 800 series</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BALB/c mice</td>
			<td>Jackson Laboratory</td>
			<td>Model #000651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">1 mL syringes</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">26-gauge needles</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21-gauge butterfly needles</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>367281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethylenediaminetetraacetic acid&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>60004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Round-bottom test tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>60819-546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate-buffered saline&#160;</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stainless steel spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stainless steel scissors (6.5 in)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-592</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stainless steel scissors (4.5 in)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stainless steel blunt forceps&#160; (4.5 in)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stainless steel fine tip forceps&#160; (6 in)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-406</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

listeria monocytogenes infection of the brain

الليستريه المستوحدة من مسببات الأمراض بكتيرية داخل الخلايا التي كثيرا ما يرتبط بالعدوى المنقولة عن طريق الأغذية. قدرة لام الليستريه على عبور حاجز الدم في الدماغ (بي بي بي) المتعلقة بأنها يمكن أن تؤدي إلى التهاب السحايا والتهاب الدماغ مهددة للحياة. بي بي بي يحمي المكروية الدماغ من مختلف نواتج الأيض السامة ومسببات الأمراض الميكروبية الموجودة في الدم بعد الإصابة، ويدعم ذلك التوازن في الدماغ. أن الآليات التي لام الليستريه موجودة في مجرى الدم عبر BBB التسبب في الدماغ العدوى ليست مفهومة فهما كاملا وهناك أيضا الافتقار إلى نظام نموذجي قوية لدراسة التهابات الدماغ لام الليستريه. هنا، نحن نقدم نموذج عدوى ماوس بسيطة لتحديد ما إذا كانت البكتيريا قد عبرت بي بي بي وكوانتيتاتي عبء البكتيريا التي قد استعمرت الدماغ في فيفو. في هذا الأسلوب، الحيوانات أصيبوا عن طريق الوريد مع الليستريه ل. وقد euthanized معاملة إنسانية بالتعرض لأول أكسيد الكربون2 متبوعاً بخلع عنق الرحم. وأجرى التروية القلبية للحيوانات قبل حصادها الأجهزة المصابة. تم جمع الدم قبل التروية ويتحدد العدد من البكتيريا في الجهاز أو مل من الدم تصفيح تخفيف هوموجيناتيس الدم أو الجهاز على ألواح أجار وإحصاء عدد المستعمرات وشكلت. يمكن استخدام هذا الأسلوب لدراسة التفاعلات يجند مستقبلات الرواية التي تعزز الإصابة بالدماغ لام الليستريه ويمكن تكييفها بسهولة لدراسة مسببات الأمراض البكتيرية متعددة.

فاسكولاريزيد الدماغ هو الغاية و لام الليستريه المعروف لتصيب أنواع الخلايا الموجودة في الدم3،13. يستخدم بروتوكول وصف لإثبات قدرة لام الليستريه على عبور حاجز الدم في الدماغ (بي بي بي) مما أدى إلى إصابة في الدماغ في الفئران. لتحديد إذ...

Watch this Scientific Journal Video about Listeria monocytogenes Infection of the Brain at JoVE.com

Listeria monocytogenes Infection of the Brain

الليستريه المستوحدة التهاب الدماغ

خلال العدوى، الليستريه المستوحدة قادرة على عبور حاجز الدم في الدماغ لاستعمار الدماغ. في هذا البروتوكول، ونحن لشرح كيفية تقييم الاستعمار الجرثومي للأجهزة بعد إصابة فئران. ويرد إجراء لأداء الجهاز كله نضح لتصميم محددة من أرقام البكتيرية في حمة الدماغ.

Listeria monocytogenes is an intracellular bacterial pathogen that is frequently associated with food-borne infection. The ability of&#160;L. ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال التسبب بالبكتيريا حول ما إذا كانت البكتيريا المنقولة بالدم يمكن أن تعبر حاجز الدم في الدماغ لتصيب الجهاز العصبي المركزي والدماغ. مع هذه التقنية، يمكن تحديد الأرقام البكتيرية داخل أنسجة الدم والدماغ للحيوانات المصابة مع استبعاد عدد البكتيريا المقيمة داخل الأوعية الدموية في الدماغ. إثبات الإجراء سيكون باللاب غوش، باحث مشارك من مختبري.في 72 ساعة بعد العدوى، تعيين نظام ضخ الآلي لمعدل تدفق أربعة ملليلتر من برنامج تلفزيوني تكملها 10 ملليمولار من EDTA في الدقيقة الواحدة. ووضع الحيوان القتل الرحيم في موقف supine في مقلاة تشريح. تأكيد القتل الرحيم من عدم الاستجابة لقرصة مخلب.وبلّل البطن بنسبة 75٪ من الإيثانول. استخدام مقص لجعل شق جدار البطن إلى أسفل القفص الصدري لفضح الحجاب الحاجز والأعضاء الحشوية. وقطع الحجاب الحاجز لفتح تجويف الصدر.قطع قفص فرك ثنائيا لفضح البطين الأيسر واستخدام ملقط لفهم بلطف القلب. أدخل إبرة فراشة قياس 21 قياسا متصلة بنظام القذف في البطين الأيسر وقطع بعناية الأذين الأيمن لجمع حوالي 200 ميكرولتر من الدم في أنبوب مليلتر يحتوي على 10 ملليمولار EDTA لمنع التخثر. ثم اثقب الحيوان لمدة أربع دقائق مع 15 إلى 20 ملليلتر من PBS بالإضافة إلى EDTA.بعد التسريب الكامل ، سيظهر الدماغ والكبد مبيضًا لضمان أن البكتيريا المتبقية هي من الأعضاء التي تم حصادها وليس من الدم المتداول. بعد التسريب، ونقل بعناية الأجهزة ذات الأهمية إلى الفردية العقيمة، 15 ملليلتر أنابيب المخروطية التي تحتوي على خمسة ملليلتر من معقم أربع درجات مئوية PBS لكل أنبوب. لحصاد الدماغ بعد قطع الرأس، استخدم المقص لقطع جلد فروة الرأس أسفل خط الوسط بين العينين، مع الاحتفاظ بالنصائح التي تم الضغط عليها ضد الجمجمة لتقليم أي أنسجة زائدة حسب الضرورة.أدخل بلطف طرف واحد من المقص في ماغنوم السفح وقطعه بشكل جانبي في الجمجمة على كلا الجانبين. قطع الجمجمة بعناية بين العينين أسفل خط الوسط في الجمجمة، مع الحرص على تطبيق الضغط الجانبي وتجنب الانزعاج في الدماغ. باستخدام ملقط، وفتح الجمجمة لفضح الدماغ ووضع ملعقة بين الجانب السفلي من الدماغ وقاعدة الجمجمة لنقل الدماغ بعناية إلى أنبوب 15 ملليلتر تحتوي على خمسة ملليلتر من أربع درجات مئوية برنامج تلفزيوني.في مجلس الوزراء السلامة الأحيائية، إدراج تلميح وتشغيل التجانس الأنسجة لمدة 10 ثانية في 5٪ تبييض متتابعة، والمياه المعقمة، 75٪ الإيثانول، وحلول المياه المعقمة في أنابيب مخروطية 15 ملليلتر منفصلة. عندما تم تعقيم الطرف بشكل دقيق ، التجانس الدماغ المصاب في أنبوب لها. عندما لا تبقى أي شظايا الأنسجة مرئية، إعادة تعقيم طرف لمنع الحمل البكتيري إلى عينة الجهاز المقبل، وتجانس الجهاز التالي.عندما تم تجانس جميع الأعضاء ، وإعداد 10 أضعاف التخفيفات المسلسلة لكل جهاز تجانس في برنامج تلفزيوني عقيم وطبقة التخفيف على الدماغ القلب ضخ لوحات أجار. ثم احتضان ثقافات التخفيف المتجانسة عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها، وحص عدد المستعمرات على كل صفيحة لتحديد العدد الإجمالي للبكتيريا لكل عضو أو ملليلتر من الدم. حساب الأعباء البكتيرية في أجهزة الماوس المصابة L.monocytogenes كما هو موضح للتو يشير إلى أن الضخ بعد العدوى لا يغير بشكل كبير من العبء البكتيري في الدم أو أعضاء الفئران المصابة التي تم فحصها في هذه الدراسة التمثيلية.بعد هذا الإجراء، يمكن معالجة الأجهزة المصابة بـ Listeria monocytogenes لإجراء تحليل إضافي مثل المعالجة الهدولوجية للإجابة على أسئلة إضافية حول تسلل الخلايا الالتهابية إلى أجهزة الماوس المصابة مقارنة بالحيوانات غير المصابة. أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم أن نتذكر تجنب الانزعاج في الدماغ والحفاظ على الحد الأدنى من الاتصال بين المقص وأنسجة الدماغ.

الليستريه المستوحدة التهاب الدماغ

Abstract