Generering av kreft cellen kloner å visualisere Telomeric gjenta inneholder RNA TERRA uttrykt fra en enkelt Telomere i levende celler

Telomeres er transkribert, gir opphav til telomeric gjenta inneholder lang noncoding RNAs (TERRA), som har blitt foreslått å spille viktige roller i telomere biologi, inkludert heterochromatin formasjon og telomere lengde homeostase. Nyere funn avslørte at TERRA molekyler også samhandle med interne chromosomal områder å regulere byggkorn under musen embryonic stem (ES) celler. I tråd med dette beviset, RNA fluorescens i situ hybridisering (RNA-fisk) analyser har vist at bare et delsett av TERRA transkripsjoner lokalisere kromosom slutter. En bedre forståelse av dynamikken i TERRA molekyler bidrar til å definere deres funksjon og virkningsmekanismer. Her beskriver vi en metode for å merke og visualisere single-telomere TERRA utskrifter i celler ved hjelp av MS2-GFP-systemet. Til dette målet presenterer vi en protokoll for å generere stabil kloner, bruker AGS menneskelige mage kreft cellen linjen som inneholder MS2 sekvenser integrert på en enkelt subtelomere. Transkripsjon av TERRA fra MS2-merket telomere gir uttrykk for MS2-merket TERRA molekyler som er visualisert ved live-celle fluorescens mikroskopi på co uttrykk for et MS2 RNA-bindende protein smeltet til GFP (MS2-GFP). Dette gir forskere til å studere dynamikken i enkelt-telomere TERRA molekyler i kreftcellene, og den kan brukes på andre linjer.