Un'analisi di clivaggio Peptide fluorogenico alla schermata per attività proteolitica: applicazioni per coronavirus spike l'attivazione della proteina

Virus capsulati quali coronavirus o influenza virus richiedono clivaggio proteolitico del loro proteina di fusione per essere in grado di infettare la cellula ospite. Spesso i virus esibiscono il trofismo delle cellule e dei tessuti e sono adattati alle specifiche proteasi delle cellule o del tessuto. Inoltre, questi virus possono introdurre mutazioni o inserimenti nel loro genoma durante la replica che può influenzare la fenditura e può contribuire così a adattamenti ad un nuovo ospite. Qui, presentiamo un saggio di clivaggio di peptide fluorogenico che consente un rapido screening di peptidi che imita il sito di clivaggio delle proteine di fusione virale. La tecnica è molto flessibile e può essere utilizzata per studiare l'attività proteolitica di una proteasi singola su molti substrati diversi, e inoltre, permette anche l'esplorazione dell'attività delle proteasi multiple su uno o più substrati del peptide. In questo studio, abbiamo utilizzato peptidi che imita i motivi del sito di clivaggio della proteina spike coronavirus. Abbiamo testato umano e cammello derivato coronavirus della sindrome respiratoria Medio Oriente (MERS-CoV) per dimostrare che singole e doppie sostituzioni nel sito di clivaggio possono alterare l'attività della Furina e modificare drasticamente l'efficienza di clivaggio. Abbiamo anche usato questo metodo in combinazione con bioinformatica per attività di clivaggio furin di coronavirus felino spike proteine da diversi sierotipi e di ceppi di test. Questo metodo basato a peptide è meno manodopera e tempo intensivo rispetto ai metodi tradizionali utilizzati per l'analisi di attività proteolitica per virus e risultati possono essere ottenuti all'interno di un singolo giorno.