JoVE Logo

Sign In

Abstract

Neuroscience

إنتاج وتنقية ومراقبة الجودة لناقلات القائم على الفيروسات المرتبطة بالغدة

Published: January 29th, 2019

DOI:

10.3791/58960

1VIB-KU Leuven Center for Brain and Disease Research, 2Department of Neuroscience, KU Leuven, 3Leuven Brain Institute

* These authors contributed equally

Abstract

أدوات توصيل الجينات استناداً إلى فيروسات الغدد المرتبطة (AAVs) خيار شعبي لإيصال المتسلسلات للجهاز العصبي المركزي (CNS)، بما في ذلك تطبيقات العلاج الجيني. إف الناقلة عدم تكرار، قادرة على إصابة الفاصل وعدم تقسيم الخلايا وتوفير طويل الأجل التحوير التعبير. الأهم من ذلك، بعض اللقاح، مثل بي إتش بي وصف حديثا. ب، يمكن عبر الدم-الدماغ-الجدار (بي بي بي) في نماذج حيوانية، عقب تسليم الجهازية. يمكن أن تنتج نواقل إف كفاءة في المختبر. ومع ذلك، قوية واستنساخه البروتوكولات مطالبون بالحصول على ناقلات إف مع مستويات النقاء كافية وعيار قيم عالية بما يكفي للتطبيقات في فيفو . ويصف هذا البروتوكول استراتيجية فعالة واستنساخه لإنتاج ناقلات إف، استناداً إلى استراتيجية تدرج تنقية إيوديكسانول. طريقة تنقية إيوديكسانول مناسبة للحصول على دفعات ناقلات إف عيار ارتفاع درجة نقاء عالية، عند مقارنتها بأساليب تنقية أخرى. وعلاوة على ذلك، أن البروتوكول عادة أسرع من الطرق الأخرى المذكورة حاليا. وباﻹضافة إلى ذلك، سلسلة بوليميراز كمية رد فعل (qPCR)-يتم وصف الاستراتيجية القائمة على أساس لتحديد عيار ناقلات الأمراض، فضلا عن فضية تلطيخ طريقة سريعة ودقيقة لتحديد نقاء دفعة ناقلات. وأخيراً، نتائج تمثيلية لإيصال الجينات إلى الجهاز العصبي المركزي، بعد الإدارة النظامية من إف-بي. ب، وترد. يجب أن تكون هذه النتائج الممكنة في جميع مختبرات استخدام بروتوكولات الموضحة في هذه المقالة.

Explore More Videos

143

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved