与腺相关病毒的向量的生产、纯化和质量控制

基于腺病毒相关病毒 (aav) 的基因传递工具是将转基因传递到中枢神经系统 (cns) 的热门选择, 包括基因治疗应用。aav 载体是不可复制的, 能够感染分裂和非分裂细胞, 并提供长期的转基因表达。重要的是, 一些血清型, 如新描述的 php。b, 在系统分娩后, 可以在动物模型中跨越血脑屏障 (bbb)。aav 矢量可以在实验室中高效地产生。然而, 需要可靠和可重复的协议来获得纯度水平足够高的 aav 载体, 并获得足够高的滴度值, 以满足体内的应用。该协议描述了一种基于碘沙诺梯度纯化策略的 aav 矢量生产的高效、可重现的策略。与其他纯化方法相比, 碘沙诺纯化方法适用于获得成批的高纯度高滴度 aav 载体。此外, 该协议通常比目前描述的其他方法更快。此外, 还描述了一种基于定量聚合酶链反应 (qpcr) 的策略, 用于快速、准确地测定矢量滴度, 以及银染色方法来确定矢量批次的纯度。最后, 在对 aav-php 进行系统管理后, 向中枢神经系统传递基因的代表性结果。b, 被介绍。在使用本文中描述的协议的所有实验室中, 这样的结果都应该是可能的。