Productie, zuivering en kwaliteitscontrole voor Adeno-associated Virus gebaseerde vectoren

Gene levering hulpmiddelen op basis van adeno-geassocieerde virussen (AAVs) zijn een populaire keuze voor de levering van transgenen aan het centrale zenuwstelsel (CNS), met inbegrip van gen-therapie-toepassingen. AAV vectoren zijn niet-repliceren, kunnen zowel de scheidingslijn en de niet-delende cellen infecteren en op lange termijn transgenic expressie. Nog belangrijker is, sommige serotypen, zoals het zojuist beschreven PHP. B, kan Kruis de bloed-hersen-barrière (BBB) in diermodellen, na systemische levering. AAV vectoren kunnen efficiënt geproduceerd worden in het laboratorium. Robuust en reproduceerbare protocollen zijn echter vereist om te verkrijgen van AAV vectoren met voldoende zuiverheid niveaus en waarden van de titer hoog genoeg voor in vivo toepassingen. Dit protocol beschrijft een efficiënte en reproduceerbare strategie voor AAV vector productie, op basis van een strategie voor de kleurovergang zuivering van iodixanol. De iodixanol zuivering methode is geschikt voor het verkrijgen van batches van hoge-titer AAV vectoren van hoge zuiverheid, in vergelijking met andere methoden van zuivering. Bovendien is het protocol over het algemeen sneller dan andere methoden die momenteel beschreven. Bovendien een kwantitatieve polymerase ketting reactie (qPCR)-gebaseerde strategie wordt beschreven voor een snelle en nauwkeurige bepaling van de vector-titer, evenals een silver kleuring methode om te bepalen van de zuiverheid van de vector-partij. Ten slotte, representatieve resultaten van gene levering aan de CNS, na systemische toediening van AAV-PHP. B, worden gepresenteerd. Dergelijke resultaten moeten mogelijk zijn in alle laboratoria met behulp van de protocollen die in dit artikel beschreven.