Production, Purification et contrôle de la qualité pour les vecteurs de base de Virus Adeno-associé

Outils de livraison de gène issus des virus adéno-associés (AAVs) sont un choix populaire pour la livraison des transgènes au système nerveux central (CNS), y compris les applications de la thérapie génique. Des vecteurs d’AAV sont non répliquées, capable d’infecter des cellules en division et non de division et de fournir l’expression transgénique à long terme. Ce qui est important, certains sérotypes, tels que le PHP nouvellement décrit. B, peut traverser la sang-encéphalique (BHE) dans des modèles animaux, après délivrance systémique. Des vecteurs d’AAV peuvent être efficacement produites en laboratoire. Cependant, les protocoles robustes et reproductibles sont tenus d’obtenir des vecteurs d’AAV avec des niveaux suffisants de pureté et de valeurs titre suffisamment élevées pour des applications in vivo . Ce protocole décrit une stratégie efficace et reproductible pour la production de vecteur AAV, basée sur une stratégie de purification gradient d’iodixanol. La méthode de purification iodixanol est adaptée pour l’obtention de lots de vecteurs AAV haut-titre de haute pureté, par rapport aux autres méthodes de purification. En outre, le protocole est généralement plus rapide que les autres méthodes actuellement décrites. En outre, une quantitative polymerase chain réaction (qPCR)-basé de stratégie est décrite pour la détermination rapide et précise de la titre de vecteur, ainsi qu’une méthode de coloration à l’argent déterminer la pureté du lot vector. Enfin, des résultats représentatifs de l’injection de gène dans le SNC, suite à l’administration systémique d’AAV-PHP. B, sont présentés. Ces résultats devraient être possibles dans tous les laboratoires utilisant les protocoles décrits dans cet article.