Produktion, Reinigung und Qualitätskontrolle für Adeno-assoziierten Virus-basierte Vektoren

Gen Lieferung Tools basierend auf Adeno-assoziierten Viren (Flugabwehrpanzer) sind eine beliebte Wahl für die Lieferung von transgenen an das zentrale Nervensystem (ZNS), einschließlich Gen-Therapie-Anwendungen. AAV-Vektoren sind nicht replizieren, trennende und nicht teilenden Zellen infizieren und bieten langfristigen Transgene Ausdruck. Wichtiger ist, einige Serotypen, wie die neu beschriebene PHP. B, kann über die Blut-Hirn-Schranke (BBB) in Tiermodellen, nach systemischen Lieferung. AAV-Vektoren können effizient im Labor hergestellt werden. Stabile und reproduzierbare Protokolle sind jedoch erforderlich, AAV-Vektoren mit ausreichend Reinheitsgrade und Titer Werte hoch genug für in-Vivo Anwendungen zu erhalten. Dieses Protokoll beschreibt eine effiziente und reproduzierbare Strategie für AAV Vektor Produktion, basierend auf einer Iodixanol gradient Reinigung Strategie. Die Iodixanol Reinigungsverfahren eignet sich für Chargen von hoher Titer AAV-Vektoren von hoher Reinheit zu erhalten, im Vergleich zu anderen Reinigungsverfahren. Darüber hinaus ist das Protokoll in der Regel schneller als andere Methoden, die derzeit beschrieben. Darüber hinaus eine quantitative Polymerase Kettenreaktion (qPCR)-Strategiespiel ist für eine schnelle und genaue Bestimmung der Vektor-Titer, sowie eine silberne Färbung Methode festzustellen, die Reinheit der Vektor Charge beschrieben. Zu guter Letzt repräsentative Ergebnisse der gen-Lieferung an die CNS nach systemischer Gabe von AAV-PHP. B, werden vorgestellt. Solche Ergebnisse sollte in allen Labors mit den Protokollen, die in diesem Artikel beschriebenen möglich sein.