Produzione, purificazione e controllo di qualità per i vettori basati su Virus Adeno-associato

Gene consegna strumenti basati su virus adeno-associato (AAVs) sono una scelta popolare per la consegna dei transgeni al sistema nervoso centrale (CNS), tra cui applicazioni di terapia genica. I vettori AAV sono non replicare, in grado di infettare le cellule di divisione e divisione e fornire a lungo termine espressione del transgene. Cosa importante, alcuni sierotipi, ad esempio il PHP recentemente descritto. B, può attraversare la sangue-cervello-barriera (BBB) nei modelli animali, seguendo la consegna sistematica. Vettori di AAV possono essere prodotto in modo efficiente in laboratorio. Tuttavia, protocolli affidabili e riproducibili sono necessari per ottenere vettori AAV con sufficienti livelli di purezza e i valori del titolo abbastanza alti per applicazioni in vivo . Questo protocollo descrive una strategia efficiente e riproducibile per la produzione di vettore AAV, basata su una strategia di purificazione gradiente di iodixanol. Il metodo di purificazione di iodixanol è adatto per ottenere lotti di vettori AAV alto-titolo di elevata purezza, quando rispetto ad altri metodi di purificazione. Inoltre, il protocollo è in genere più veloce rispetto ad altri metodi attualmente descritti. Inoltre, una polimerasi quantitativa (qPCR) di reazione a catena-strategia di base è descritto per una determinazione rapida e accurata del titolo di vettore, come pure un argento che macchia il metodo determinare la purezza del batch vettoriale. Infine, i risultati rappresentativi di consegna del gene al SNC, dopo somministrazione di AAV-PHP. B, sono presentati. Tali risultati dovrebbero essere possibile in tutti i laboratori utilizzando i protocolli descritti in questo articolo.