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Neuroscience

生産・精製・ アデノ随伴ウイルスを用いたベクトルの品質管理

Published: January 29th, 2019

DOI:

10.3791/58960

1VIB-KU Leuven Center for Brain and Disease Research, 2Department of Neuroscience, KU Leuven, 3Leuven Brain Institute

* These authors contributed equally

Abstract

アデノ随伴ウイルス (通気) に基づく遺伝子配信ツールは、遺伝子療法アプリケーションを含む中枢神経系 (CNS) に transgenes の配信するための人気のある選択肢です。AAV のベクトルは非複製、分割、非分割の細胞に感染して長期的な遺伝子発現を提供することができます。重要なは、いくつかの血清型、新しく記述された PHP など。B、血液脳関門 (BBB) 動物モデルでクロスすることができます以下の全身配信。研究室での AAV のベクトルを効率的に生成できます。しかし、堅牢かつ再現性のあるプロトコルが十分な純度のレベルと十分な体内用高価値の AAV のベクトルを取得する必要です。このプロトコルでは、iodixanol の勾配浄化戦略に基づいて、AAV のベクトル生産の効率的かつ再現可能な戦略について説明します。Iodixanol の浄化方法は、他の浄化方法と比較した場合の高純度、高価 AAV ベクターのバッチを取得に最適です。さらに、プロトコルは一般に現在記載されている他の方法よりも高速です。さらに、量的なポリメラーゼの連鎖反応 (qPCR)-ベクトルの純度を決定するベクトル力価として銀染色法の迅速かつ正確な定量ベースの戦略を説明。最後に、AAV PHP の全身投与、中枢神経系への遺伝子導入の代表の結果。B が表示されます。このような結果は、この資料に記載されているプロトコルを使用してすべてのラボでできるはずです。

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143 AAV iodixanol PHP B

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