Produksjon, rensing og kvalitetskontroll for Adeno-assosiert Virus-basert vektorer

Gen levering verktøy basert på adeno-assosiert virus (AAVs) er et populært valg for levering av effekter av transgener til sentralnervesystemet (CNS), inkludert gene terapi programmer. AAV vektorer er ikke-replikering, kan infisere både dele og ikke dele celler og gi langsiktig transgene uttrykk. Viktigere, noen serotyper, som nylig beskrevet PHP. B, kan krysse blod-hjerne-barrieren (BBB) i dyremodeller, etter systemisk levering. AAV vektorer kan være effektivt produsert i laboratoriet. Robust og reproduserbar protokoller er imidlertid nødvendig for å hente AAV vektorer med tilstrekkelig renhet nivåer og titer verdiene høy nok for i vivo programmer. Denne protokollen beskriver en effektiv og reproduserbar strategi for AAV vektor produksjon basert på en iodixanol gradient rensing strategi. Iodixanol rensing metoden er egnet for å få grupper av høy-titer AAV vektorer av høy renhet, sammenlignet med andre metoder for rensing. Videre er protokollen raskere enn andre metoder for øyeblikket beskrevet. I tillegg en kvantitativ polymerase kjede reaksjon (qPCR)-basert strategi er beskrevet for en rask og nøyaktig bestemmelse av vektor titer, samt en silver flekker metode å avgjøre renheten av vektor bunken. Til slutt, representant resultatene av genet levering til CNS etter systemisk administrasjon av AAV-PHP. B, presenteres. Slike resultater bør være mulig i alle labs ved hjelp av protokoller som er beskrevet i denne artikkelen.