उपंयास की पहचान CK2 kinase एक बहुमुखी जैव रासायनिक दृष्टिकोण का उपयोग substrates

काइनेज-सब्सट्रेट संबंधों के अध्ययन के लिए इन एंजाइमों और दोनों शारीरिक और रोग राज्यों में उनके बहाव के लक्ष्य के कार्यों की एक पूरी समझ हासिल करने के लिए आवश्यक है । CK2 कई सेलुलर प्रक्रियाओं में शामिल substrates के सैकड़ों की बढ़ती सूची के साथ एक विकासवादी संरक्षित सेरीन/threonine कळेनासे है । इसकी अधिकता गुण के कारण, की पहचान करने और CK2 substrates के एक व्यापक सेट की विशेषता विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण हो गया है और इस महत्वपूर्ण एंजाइम के अध्ययन में एक बाधा बनी हुई है. इस चुनौती को संबोधित करने के लिए, हम एक बहुमुखी प्रयोगात्मक रणनीति है कि लक्षित संवर्धन और ख्यात CK2 substrates की पहचान के लिए सक्षम बनाता है तैयार किया है । यह प्रोटोकॉल अद्वितीय दोहरी सह-सब्सट्रेट विशिष्टता का लाभ लेता है CK2 की विशिष्ट थियोफॉस्फोरेलेशन के लिए अनुमति देता है एक सेल या ऊतक lysate में इसके substrate. इन सब्सट्रेट प्रोटीन बाद में alkylated हैं, immunoprecipitated, और तरल क्रोमेटोग्राफी द्वारा की पहचान की/अग्रानुक्रम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-ms/ हम पहले इस दृष्टिकोण का इस्तेमाल किया है सफलतापूर्वक drosophila अंडाशय से CK2 substrates की पहचान करने के लिए और यहां हम मानव ग्लोब्लास्टोमा कोशिकाओं के लिए इस प्रोटोकॉल के आवेदन का विस्तार, इस विधि की जांच करने के लिए ग्राह्यता illustrating विभिन्न मॉडल जीवों और प्रायोगिक प्रणालियों में इस काइनेज की जैविक भूमिकाएं ।