Quantificazione di tutto il proteoma di etichettatura omogeneità a livello di singola molecola

Proteomi cellulari sono spesso caratterizzati utilizzando dosaggi di elettroforesi, dove tutte le specie delle proteine nelle cellule non specifico sono marcate con un colorante fluorescente e sono individuate da una cellula fotoelettrica dopo la loro separazione. Formazione immagine di fluorescenza di singola molecola può fornire rilevamento ultrasensibile della proteina con la sua capacità per la visualizzazione di singole molecole fluorescenti. Tuttavia, l'applicazione di questo potente metodo di imaging a saggi di elettroforesi è ostacolata dalla mancanza di modi per caratterizzare l'omogeneità dell'etichettatura fluorescente di ogni specie di proteine attraverso il proteoma. Qui, abbiamo sviluppato un metodo per valutare l'omogeneità d'etichettatura attraverso il proteoma basato su un'analisi di formazione immagine di fluorescenza singola molecola. Nella nostra misura utilizzando un campione di cellule HeLa, la proporzione di proteine etichettate con almeno un colorante, che abbiamo chiamato 'etichettatura occupazione' (LO), è stato determinato per gamma dal 50% al 90%, sostenere l'elevato potenziale dell'applicazione di imaging di singola molecola di analisi del proteoma sensibile e precisa.