Avbildning av extracellulära blåsor med atomkraft mikroskopi

Exosomes och andra extracellulära blåsor (EVs) är molekylära komplex bestående av en lipid membran vesikel, dess yta dekoration av membranproteiner och andra molekyler, och varierande luminala innehåll ärvs från en förälder cell, som omfattar RNAs, proteiner och DNAs. Karakteriseringen av de hydrodynamiska storlekarna av EVs, som beror på storleken på vesikeln och dess koronala skikt som bildas av ytdekorationer, har blivit rutin. För exosomer, den minsta av EVs, är den relativa skillnaden mellan de hydrodynamiska och vesikler storlekar betydande. Karakterisering av vesikler storlekar av kryogen transmission elektronmikroskopi (cryo-TEM) avbildning, en guld standardteknik, är fortfarande en utmaning på grund av kostnaden för instrumentet, den expertis som krävs för att utföra provet beredning, avbildning och dataanalys och ett litet antal partiklar som ofta observeras i bilder. Ett allmänt tillgängligt och lättillgängligt alternativ är Atom kraftens mikroskopi (AFM), som kan producera mångsidiga data om tredimensionell geometri, storlek och andra biofysiska egenskaper hos extracellulära blåsor. Det utvecklade protokollet vägleder användarna i utnyttjandet av detta analysverktyg och beskriver arbetsflödet för analys av EVs av AFM, vilket inkluderar prov preparationen för avbildning av EVs i hydrerad eller Desiccated form, elektrostatisk immobilisering av substrat, datainsamling, analys och tolkning. De representativa resultaten visar att fixering av EVs på den modifierade glimmer ytan är förutsägbar, anpassningsbar, och tillåter användaren att få dimensionerings resultat för ett stort antal blåsor. Vesikeldimensionering baserad på AFM-data konstaterades överensstämma med cryo-TEM Imaging.