לאחר בידול מחדש של תא גזע האדם Pluriפוטנטי-הנוירונים הנגזרים עבור הקרנת תוכן גבוה של Neuritogenesis והתבגרות סינפסה

נוירונים הבדיל בתרבות דו מימדית מפני הגזע האנושי האנטי-עוצמה הנגזר של התאים (NPCs) מייצגים מערכת מודל רבת עוצמה כדי לחקור מנגנוני מחלות ולבצע הקרנת תוכן גבוה (HCS) כדי לחקור תרכובת ספריות או לזהות פנוטיפים מוטציה של גנים. עם זאת, עם התאים האנושיים המעבר NPC כדי פונקציונלי, בוגרת תא העצב דורש מספר שבועות. הסינפסות בדרך כלל להתחיל להיווצר לאחר 3 שבועות של בידול בתרבות דופלקס, ומספר חלבונים ספציפיים לעצב, למשל מאוחר יותר המבטא פאן-עצבי סמן neun, או השכבה 5/6 מוחין תא העצב הקליפת המוח סמן CTIP2, להתחיל לבטא סביב 4-5 שבועות לאחר בידול. זמן זה בידול ארוך יכול להיות בלתי תואם עם תנאי התרבות האופטימלית המשמש נפח קטן, multi-היטב פלטפורמות HCS. בין האתגרים הרבים הינם הצורך בתאים מבוזרים ומפוזרים בצורה אחידה עם אשכולות תאים מינימליים, והליכי תרבות המאומצים על הכדאיות ארוכת הטווח וההבשלה הפונקציונלית של הסינפסה. גישה אחת היא להבדיל נוירונים בפורמט גדול נפח, ואז לשחזר אותם בשלב מאוחר יותר ב HCS תואם multi-בארות. כמה אתגרים עיקריים כאשר משתמשים בגישה זו ציפוי מחדש מודאג הכדאיות ויכולת התאים, בשל שיבוש מלחיץ של רשת הדנדריטים והאקונאליות. כאן אנו מדגימים הליך מפורט ואמין עבור השעיית האדם המושרה בצורה מבחינה אנזיבית (היפנוטית)-נגזר הנוירונים לאחר הבידול שלהם עבור 4-8 שבועות בפורמט גדול של נפח, העברת אותם 384-היטב microtiter צלחות, ו culturing אותם לעוד 1-3 שבועות עם הישרדות תא מעולה. זה ציפוי מחדש של נוירונים אנושיים לא רק מאפשר את המחקר של הרכבה סינפסה בתוך שבועיים מחדש, אבל גם מאפשר מחקרים של התחדשות neurite ומאפיינים חרוט הצמיחה. אנו מספקים דוגמאות של asuritogenesis ו synaptogenesis באמצעות פלטפורמת 384-היטב.