Gamete Collection och in vitro fertilisering av Astyanax Auktor

Astyanax Auktor växer fram som modellorganism för en mängd olika forskningsområden inom biologisk vetenskap. En del av den senaste framgången för denna benfisk fiskarter är att den besitter interfertil grotta och flod-bostad populationer. Detta möjliggör genetisk mappning av ärftliga egenskaper som fastställdes under anpassningen till de olika miljöerna i dessa populationer. Medan denna art kan upprätthållas och föds upp i labbet, det är utmanande att både få embryon under dagtid och skapa hybrid embryon mellan stammar. In vitro-fertilisering (IVF) har använts med en mängd olika modellorganismer för att framgångsrikt och upprepade gånger föda upp djur i labbet. I detta protokoll visar vi hur, genom att acklimatisera A. Auktor till olika ljus cykler i kombination med förändringar i vattentemperaturen, kan vi flytta avel cykler till en vald tid på dagen. Därefter visar vi hur man identifierar lämplig föräldra fisk, samla friska könsceller från män och kvinnor, och producera livskraftiga avkomma med hjälp av IVF. Detta gör att relaterade procedurer såsom injektion av genetiska konstruktioner eller utvecklings analys ska inträffa under normal arbetstid. Dessutom kan denna teknik användas för att skapa hybrider mellan grottan och ytbostadens populationer, och därigenom möjliggöra studiet av den genetiska grunden för fenotypiska anpassningar till olika miljöer.