Verarbeitung von Bronchoalveolar Lavage Fluid und Matched Blood für Alveolar Macrophage und CD4⁺ T-Zell Immunophenotypisierung und HIV Reservoir Assessment

Bronchoskopie ist ein medizinisches Verfahren, bei dem normale Saline über ein Bronchoskop in die Lunge injiziert wird und dann abgesaugt wird, wodurch Bronchoalveolar-Lavage (BAL)-Flüssigkeit entfernt wird. Die BAL-Flüssigkeit ist zellreich und kann somit eine "Schnappschuss" des lungenen Immunmilieus liefern. CD4-T-Zellen sind die am besten charakterisierten HIV-Reservoirs, während es starke Hinweise darauf gibt, dass Gewebemakrophagen, einschließlich Alveolarmakrophagen (AMs), auch als virale Reservoirs dienen. Über die Rolle von AMs im Zusammenhang mit der Einrichtung und Wartung von HIV-Reservoirs ist jedoch noch vieles unbekannt. Daher ist die Entwicklung eines Protokolls zur Verarbeitung von BAL-Flüssigkeit zur Gewinnung von Zellen, die in virologischen und immunologischen Assays zur Charakterisierung und Bewertung der Zellpopulationen und Teilmengen innerhalb der Lunge verwendet werden können, für das Verständnis der Rolle der Lunge als HIV relevant. Stauseen. Hierin beschreiben wir ein solches Protokoll, das Standardtechniken wie einfache Zentrifugation und Durchflusszytometrie verwendet. Die CD4-T-Zellen und AMs können dann für nachfolgende Anwendungen verwendet werden, einschließlich Immunphenotypisierung und HIV-DNA- und RNA-Quantifizierung.