Trattamento del bronchoalveolar Lavage Fluid e del sangue abbinato per il macrofago alveoere e CD4^- Immunofenotyping a cellule T e valutazione del serbatoio dell'HIV

La broncoscopia è una procedura medica per cui la normale salina viene iniettata nei polmoni attraverso un broncoscopio e quindi viene applicata l'aspirazione, rimuovendo il liquido bronchoalveolar lavage (BAL). Il liquido BAL è ricco di cellule e può quindi fornire un'istantanea dell'ambiente immunitario polmonare. Le cellule T CD4 sono i serbatoi HIV più caratterizzati, mentre ci sono forti prove che suggeriscono che i macrofagi tissutali, compresi i macrofagi alveolar (AM), fungono anche da serbatoi virali. Tuttavia, molto è ancora sconosciuto sul ruolo delle AM nel contesto dell'istituzione e della manutenzione del serbatoio dell'HIV. Pertanto, lo sviluppo di un protocollo per l'elaborazione del fluido BAL per ottenere cellule che possono essere utilizzate in saggi virologici e immunologici per caratterizzare e valutare le popolazioni cellulari e sottoinsiemi all'interno del polmone è rilevante per comprendere il ruolo dei polmoni come HIV Serbatoi. Qui, descriviamo un tale protocollo, impiegando tecniche standard come la semplice centrifugazione e la citometria di flusso. Le cellule T CD4 e i AM possono quindi essere utilizzati per applicazioni successive, tra cui immunofenotipizzazione e HIV e quantificazione dell'RNA.