Processamento de fluido de lavagem broncoalveolar e sangue pareado para macrófago alveolar e CD4⁺ T-Cell immunophenotyping e avaliação do reservatório de HIV

A broncoscopia é um procedimento médico pelo qual a solução salina normal é injetada nos pulmões através de um broncoscópio e, em seguida, a sucção é aplicada, removendo o fluido de lavagem broncoalveolar (LBA). O fluido de LBA é rico em células e pode, assim, fornecer um "instantâneo" do ambiente imunológico pulmonar. As células T CD4 são os melhores reservatórios de HIV caracterizados, enquanto há evidências fortes para sugerir que os macrófagos teciduais, incluindo macrófagos alveolares (AMs), também servem como reservatórios virais. No entanto, muito ainda é desconhecido sobre o papel da AMs no contexto do estabelecimento e manutenção do reservatório de HIV. Portanto, o desenvolvimento de um protocolo de processamento do fluido BAL para obtenção de células que possam ser utilizadas em ensaios virológicos e imunológicos para caracterizar e avaliar as populações celulares e subconjuntos dentro do pulmão é relevante para a compreensão do papel dos pulmões como HIV Reservatórios. Nisto, nós descrevemos tal protocolo, empregando técnicas padrão tais como a centrifugação simples e a citometria do fluxo. As células T CD4 e AMs podem então ser utilizadas para aplicações subsequentes, incluindo a imunofenotipagem e a quantificação do ADN e do RNA do VIH.