Études ciblées utilisant le visage de bloc en série et la microscopie électronique focalisée de faisceau d'ion

Ce protocole permet l'imagerie efficace et efficace d'échantillons de cellules ou de tissus en trois dimensions au niveau de la microscopie électronique. Pendant de nombreuses années, la microscopie électronique (EM) est restée une technique intrinsèquement bidimensionnelle. Avec l'avènement des techniques d'imagerie par microscope électronique à balayage en série (volume EM), utilisant soit un microtome intégré, soit un faisceau d'ions focalisés pour trancher puis visualiser les tissus intégrés, la troisième dimension devient facilement accessible. Microscopie électronique à balayage de blocs en série (SBF-SEM) utilise un ultramicrotome enfermé dans la chambre SEM. Il a la capacité de manipuler de grands spécimens (1 000 m x 1 000 m) et d'imager de grands champs de vision à la petite taille de Pixel X, Y, mais est limité dans la dimension Z par le couteau de diamant. Le faisceau d'ions focalisé SEM (FIB-SEM) n'est pas limité en résolution 3D, (les voxels isotropes de 5 nm sont réalisables), mais le champ de vision est beaucoup plus limité. Ce protocole démontre un flux de travail pour combiner les deux techniques pour permettre de trouver des régions d'intérêt individuelles (ROI) dans un grand champ, puis d'imagerie du volume ciblé subséquent à haute résolution de voxel isotropique. La préparation de cellules ou de tissus fixes est plus exigeante pour les techniques em de volume en raison du contraste supplémentaire nécessaire pour la génération efficace de signal dans l'imagerie SEM. De tels protocoles prennent du temps et demandent beaucoup de main-d'œuvre. Ce protocole intègre également le traitement assisté par micro-ondes des tissus facilitant la pénétration des réactifs, ce qui réduit le temps nécessaire pour le protocole de traitement de jours à heures.