אנו מודים למחלקת הקליניקה לאונקולוגיה בקליבלנד לשימוש במאיצים הליניארי. אנו מודים לד ר ג'רמי ריץ ' על מתנתו הנדיבה של תאים מגזע glioma. מחקר זה נתמך על ידי מרפאת קליבלנד.

1. הכנה תאית לתרבות התא ההשעיה
<ol><li>תרבות glioma גזע כמו תאים בתוך מדיה תרבות תא גזע בערך 5 x 106 תא/10 ס"מ לוחות בחממה תרבות התא עם 5% CO2, 95% לחות יחסית ב 37 ° c. הערה: תנאי תרבות התא זהה לאורך כל ההליכים. המדיה שבשימוש בפרוטוקול היא מדיה מלאה.</li>
	<li>יומיים לפני הקרנה מתוזמנת, לאסוף בתאי גזע gl...

<ol>
	<li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> The New England Journal of Medicine. 352 (10), 987-996 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+radiotherapy+with+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+versus+radiotherapy+alone+on+survival+in+glioblastoma+in+a+randomised+phase+III+study:+5-year+analysis+of+the+EORTC-NCIC+trial.">Effects of radiotherapy with concomitant and adjuvant temozolomide versus radiotherapy alone on survival in glioblastoma in a randomised phase III study: 5-year analysis of the EORTC-NCIC trial.</a> The Lancet Oncology. 10 (5), 459-466 (2009).</li><li>Tao, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+imaging+in+upper+gastrointestinal+tumors+and+application+to+radiation+therapy.">Hypoxia imaging in upper gastrointestinal tumors and application to radiation therapy.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1044-1053 (2018).</li><li>Gajiwala, S., Torgeson, A., Garrido-Laguna, I., Kinsey, C., Lloyd, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+immunotherapy+and+radiation+therapy+strategies+for+pancreatic+cancer-targeting+multiple+steps+in+the+cancer+immunity+cycle.">Combination immunotherapy and radiation therapy strategies for pancreatic cancer-targeting multiple steps in the cancer immunity cycle.</a> Journal of Gastrointestinal Oncology. 9 (6), 1014-1026 (2018).</li><li>Liney, G. P., Whelan, B., Oborn, B., Barton, M., Keall, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRI-Linear+accelerator+raiotherapy+systems.">MRI-Linear accelerator raiotherapy systems.</a> Clinical Oncology Journal | The Royal College of Radiologists. 30 (11), 686-691 (2018).</li><li>Hall, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+dose-rate:+a+factor+of+importance+in+radiobiology+and+radiotherapy.">Radiation dose-rate: a factor of importance in radiobiology and radiotherapy.</a> The British Journal of Radiology. 45 (530), 81-97 (1972).</li><li>Steel, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dose-rate+effect+in+human+tumour+cells.">The dose-rate effect in human tumour cells.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 9 (4), 299-310 (1987).</li><li>Ling, C. C., Gerweck, L. E., Zaider, M., Yorke, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-rate+effects+in+external+beam+radiotherapy+redux.">Dose-rate effects in external beam radiotherapy redux.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 95 (3), 261-268 (2010).</li><li>Castro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amotosalen/UVA+treatment+inactivates+T+cells+more+effectively+than+the+recommended+gammadose+for+prevention+of+transfusion-associated+graft-versus-host+disease.">Amotosalen/UVA treatment inactivates T cells more effectively than the recommended gammadose for prevention of transfusion-associated graft-versus-host disease.</a> Transfusion. 58 (6), 1506-1515 (2018).</li><li>Gaddini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposing+primary+rat+retina+cell+cultures+to+&#947;-rays:+An+in+vitro+model+for+evaluating+radiation+responses.">Exposing primary rat retina cell cultures to &#947;-rays: An in vitro model for evaluating radiation responses.</a> Experimental Eye Research. 166, 21-28 (2018).</li><li>Simara, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+double-strand+breaks+in+human+induced+pluripotent+stem+cell+reprogramming+and+long-term+in+vitro+culturing.">DNA double-strand breaks in human induced pluripotent stem cell reprogramming and long-term in vitro culturing.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 73 (2017).</li><li>Wang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+the+biological+effects+of+125I+seeds+continuous+low-dose-rate+radiation+and+60Co+high-dose-rate+gamma+radiation+on+non-small+cell+lung+cancer+cells.">A comparison of the biological effects of 125I seeds continuous low-dose-rate radiation and 60Co high-dose-rate gamma radiation on non-small cell lung cancer cells.</a> PLoS One. 10 (8), 0133728 (2015).</li><li>Lasio, G., Guerrero, M., Goetz, W., Lima, F., Baulch, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+varying+dose-per-pulse+and+average+dose+rate+in+X-ray+beam+irradiation+on+cultured+cell+survival.">Effect of varying dose-per-pulse and average dose rate in X-ray beam irradiation on cultured cell survival.</a> Radiation and Environmental Biophysics. 53 (4), 671-676 (2014).</li><li>Karan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiobiological+effects+of+altering+dose+rate+in+filter-free+photon+beams.">Radiobiological effects of altering dose rate in filter-free photon beams.</a> Physics in Medicine and Biology. 58 (4), 1075-1082 (2013).</li><li>Sarojini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+combination+of+high+dose+rate+(10X+FFF/2400+MU/min/10+MV+X-rays)+and+total+low+dose+(0.5+Gy)+induces+a+higher+rate+of+apoptosis+in+melanoma+cells+in+vitro+and+superior+preservation+of+normal+melanocytes.">A combination of high dose rate (10X FFF/2400 MU/min/10 MV X-rays) and total low dose (0.5 Gy) induces a higher rate of apoptosis in melanoma cells in vitro and superior preservation of normal melanocytes.</a> Melanoma Research. 25 (5), 376-389 (2015).</li><li>Hao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extra+high+on+glioma+stem-like+cells.">The effects of extra high on glioma stem-like cells.</a> PLoS One. 13 (8), 0202533 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation-induced+G2/M+arrest+rarely+occurred+in+glioblastoma+stem-like+cells.">Radiation-induced G2/M arrest rarely occurred in glioblastoma stem-like cells.</a> International Journal of Radiation Biology. 94 (4), 394-402 (2018).</li><li>Mcdermott, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Physics and Technology of Radiation Therapy. , (2010).</li><li>Lohse, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+high+dose+per+pulse+flattening+filter-free+beams+on+cancer+cell+survival.">Effect of high dose per pulse flattening filter-free beams on cancer cell survival.</a> Radiotherapy &amp; Oncology. 101 (1), 226-232 (2011).</li></ol>

הקרנות הוא חלק אינטגרלי של ניהול סרטן. מאמצים שוטפים מבקשים לשפר את היעילות והיעילות של טיפול בקרינה. פיתוחים בטכנולוגיית המאיץ הליניארי סיפקו את ההזדמנות לטפל בחולים בדיוק ובטיחות חסרי תקדים. מכיוון שרוב המטופלים מטופלים עם קרני רנטגן גבוהות ממאיצים ליניארי, מחקרים בוחנים את ההשפעות הב...

הקרנות היא טיפול יעיל עבור סוגים רבים של סרטן1,2,3,4. מינון גבוה במיוחד הקרנה היא חדשה יחסית בטיפול בקרינה והיא מתאפשרת על ידי פיתוחים טכנולוגיים אחרונים במאיצים ליניארי5. היתרונות הקליניים של שיעור המינון הגבוה ביותר על פני מינון סטנדרטי הקרנה כוללים זמן טיפול מקוצר וניסיון משופר המטופל. מאיצים לינאריים מספקים גם הגדרה קלינית ללימודי הקרינה המבוססת על תרביות תאים. ההשלכות הביולוגי והתרפויטי של מינון הקרינה ושיעורי המינון מתמקדים בעניין של אונקולוגים קרינה וביולוגים במשך עשורים שלמים6,7,8. אבל, הרדיוביולוגיה של תוספת במינון גבוה הקרנה הקרנה פלאש-שיעור מינון גבוה מאוד של קרינה-יש עדיין נחקר ביסודיות.
קרינת גמא משמשת רבות בביולוגיה רדיואקטיבית של תרבות התאים9,10,11. קרינה מושגת על ידי קרני גמא הנפלטת ממקורות איזוטופ רדיואקטיבי מדעיכה, בדרך כלל צסיום-137. שימוש במקורות רדיואקטיביים הוא מוסדר מאוד לעתים קרובות מוגבל. עם מקור מבוסס הקרנה, זה מאתגר לבדוק מגוון רחב של שיעורי מינון, הגבלת השירות שלה בניתוח של ההשפעות הביולוגית של המינון הקליני השגה שיעור12.
היו מספר מחקרים הממחישים הן את המינון ואת ההשפעות שיעור המינון12,13,14,15,16,17. במחקרים אלה, שימשו הן גמא-הקרנה מאיזוטופים רדיואקטיביים או קרני רנטגן שנוצרו ממאיצים ליניארי. מגוון של קווי תאים המייצגים סרטן ריאות, סרטן צוואר הרחם, גלינובלסטומה, ו מלנומה שימשו. השפעות קרינה על הישרדות התא, מעצר מחזור התא, ואפופטוזיס ונזק DNA הוערכו כמו קריאות12,13,14,15,16,17 . כאן, אנו מתארים שיטה להגדיר את ההשפעות הביולוגי של מינון קליני רלוונטי ושיעורי מינון על ידי אספקת רנטגן מבוסס קרינה באמצעות מאיץ ליניארי. יש לבצע מחקרים אלה בשיתוף פעולה הדוק בין הביולוגיה, אונקולוג הקרינה והפיזיקאי הרפואי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:925px;" width="924">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Material</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">glioma stem-like cell 4121</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td>gift from Dr. Jeremy Rich</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">293 cells</td>
			<td style="width:269px;">ATCC</td>
			<td style="width:183px;">CRL-1573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">neuron stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">21103049</td>
			<td>NeurobasalTM media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">DMEM</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">10569044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">16000044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Penicillin/Streptomycin</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human EGF Protein</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>236-EG-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Recombinant Human FGF basic</td>
			<td style="width:269px;">R&#38;D Systems</td>
			<td>4114-TC-01M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">B-27&#8482; Supplement</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">17504044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Sodium Pyruvate</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">11360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">25030164</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Tripsin-EDTA</td>
			<td style="width:269px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:183px;">25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">extracellular proten matrix</td>
			<td style="width:269px;">Corning</td>
			<td style="width:183px;">354277</td>
			<td style="width:167px;">MatrigelTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Ethanol</td>
			<td style="width:269px;">Fisher chemical</td>
			<td style="width:183px;">A4094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Equipment</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">10 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">Denville</td>
			<td style="width:183px;">T1110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">3.5 cm cell culture dish</td>
			<td style="width:269px;">USA Scientific Inc.</td>
			<td style="width:183px;">CC7682-3340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">22x22mm glass cover slip</td>
			<td style="width:269px;">electron microscopy sciences</td>
			<td style="width:183px;">72210-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">15 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1159M36</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">50 ml centrifuge tube</td>
			<td style="width:269px;">Thomas Scientific</td>
			<td style="width:183px;">1158R10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">5 ml Pipette</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">14-955-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">pipet aid</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">13-681-06</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Vortex mixer</td>
			<td style="width:269px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:183px;">02-215-414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:269px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:183px;">5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Linear Accelerator</td>
			<td style="width:269px;">Varian</td>
			<td style="width:183px;">n/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:307px;">water equivalent material</td>
			<td style="width:269px;">Sun Nuclear corporation</td>
			<td style="width:183px;">557</td>
			<td>Solid waterTM</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:307px;">Reagent preparation</td>
			<td style="width:269px;"></td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:307px;">DMEM media</td>
			<td style="width:269px;">10% fetal bovine serum (FBS), 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml DMEM media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="105">
			<td height="105" style="height:105px;width:307px;">stem cell culture media</td>
			<td style="width:269px;">10 ml B27 supplement, 20 &#181;g hFGF, 20 &#181;g hEGF, 2 mM L-glutamine, 100 units/mL penicillin G, 100 &#181;g/mL streptomycin in 500 ml Neurobasal media</td>
			<td style="width:183px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of a linear accelerator for conducting in vitro radiobiology experiments

טיפול הקרינה נשאר אחד אבני היסוד של ניהול סרטן. עבור רוב סוגי הסרטן, זהו הטיפול היעיל ביותר, לא כירורגי כדי debulk גידולים. כאן, אנו מתארים שיטה לאפשר האצת תאים סרטניים עם מאיץ ליניארי. קידום טכנולוגיית המאיץ הליניארי שיפר את הדיוק והיעילות של הטיפול בקרינה. ההשפעות הביולוגי של מגוון רחב של מנות קרינה וקצבי מינון ממשיכים להיות אזור אינטנסיבי של חקירה. שימוש במאיצים ליניארי יכול להקל על מחקרים אלה באמצעות מינונים רלוונטיים קלינית ושיעורי מינון.

כדי לחקור את האפקט של מחזור התא של שיעור מינון סטנדרטי תוספת מינון גבוה הקרנה על ידי מאיץ ליניארי, שלוש דגימות של תאים גזע glioma הוכנו באמצעות פרוטוקול זה ואסף 24 שעות לאחר הקרנה17: אחד בקרת דגימת זה לא היה לקרינה (איור 2א), מדגם אחד הקרינה עם 400 MU/min (יחידת לפ?...

Watch this Scientific Journal Video about Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments at JoVE.com

Use of a Linear Accelerator for Conducting In Vitro Radiobiology Experiments

שימוש במאיץ ליניארי לניהול ניסויים רדיוביולוגיה ביולוגיה

מאיצים ליניאריים קליניים יכולים לשמש כדי לקבוע את ההשפעות הביולוגיים של מגוון רחב של שיעורי מינון על תאים סרטניים. אנו דנים כיצד להגדיר מאיץ ליניארי עבור מבוסס התא בחני והוא אומר עבור תאים גזע כמו סרטן גדל כמו כדורי tumorspheres ההשעיה וקווי התאים הגדלים כמו תרבויות חסיד.

Radiation therapy remains one of the cornerstones of cancer management. For most cancers, it is the most effective, nonsurgical therapy to debulk tumors. ...

הקרנות מועברות בתדירות הגבוהה ביותר באמצעות מאיצים ליניאריים. פרוטוקול זה מאפשר לחוקרים להעריך את ההשפעות הביולוגיות של קרינה על תאים באמצעות מאיץ ליניארי. היתרון של טכניקה זו הוא כי באמצעות מאיץ ליניארי, החוקרים יכולים לחקור מגוון רחב של מינונים רלוונטיים קלינית שיעורי המינון.יתר על כן, פרוטוקול זה יכול לשמש עבור כל סוגי התאים הסרטניים. ניתן לבצע שיטה זו באמצעות ציוד דומה לזה המוצג כאן. לדוגמה, מאיצים ליניאריים המיוצרים על-ידי ספקים אחרים.אנשים שלא חוו ביצוע חישובים דו-סימטריים באמצעות מאיץ ליניארי עשויים להיאבק כדי לחשב את המספר הנכון של יחידות צג הנדרשות כדי לספק את המינון הרצוי למדגם. הם ירוויחו על ידי המבקשים ייעוץ של פיזיקאי רפואי ניסיון או dosimetrist. מתן מינון לדגימה במדויק באמצעות מאיץ ליניארי דורש מיקום זהיר.יומיים לפני הקרנה מתוכננת, עובד מכסה המנוע תרבות, להשתמש פיפטה סטרילי חמישה מיליליטר כדי לאסוף תאים דמויי גזע גליומה מצלחת תרבות לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר. צנטריפוגה התאים ב 200 פעמים g במשך שלוש דקות בצנטריפוגה משטח. השלך את העל-טבעי ולחץ מחדש על גלולת התא עם מיליליטר אחד של טריפסין-EDTA.דגירה בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות כדי לעכל את גלולה ולעשות השעיה תא יחיד טריפסין-EDTA. כל שתי דקות במהלך העיכול, בעדינות לנער את החלק התחתון של צינור צנטריפוגה כדי לוודא את התאים מתעכלים ביסודיות. לאחר מכן הוסיפו שלושה מיליליטר של מדיה לתרבות תאי גזע כדי להתרווה על טריפסין, לערבב בעדינות, וצנטריפוגה במהירות של 200 פעמים g במשך שלוש דקות בצנטריפוגה על השיש.לאחר השלכת supernatant, resuspend את גלולת התא עם חמישה מיליליטר של מדיה תא תרבות לספור את התאים עם המוציטמטר. לוח חמישה מיליון תאים מחולקים לשני לוחות 10 ס"מ המכילים 10 מיליליטר של מדיה תרבות התא דגירה 48 שעות ב 37 מעלות צלזיוס. ממש לפני ההקרנה המתוכננת, לאסוף את התאים צנטריפוגה כפי שנעשה בעבר.השלך את העל-טבעי ולחץ מחדש על גלולת התא עם חמישה מיליליטר של מדיה של תרבות תאים. מעבירים מיליליטר אחד של השעיית תאים לצלחת של 35 מילימטר המכילה שני מיליליטר של מדיום תרבות התא, ומוודאים שהמדיום מגיע לגובה של סנטימטר אחד. מעבירים את התאים המפוקחיים למיכל משני כדי להפחית את הסיכון לזיהום ולהביא את התאים במיכל על עגלת שירות למתקן ההקרנה כדי להקרין את התאים.יום אחד לפני הקרנה, עובד מכסה המנוע של תא התרבות, להשתמש פיפטה פסטר מחובר ואקום כדי להסיר מדיום DMEM מצלחת תרבות התא לקו התא המצורף. ואז לשטוף את התאים עם חמישה מיליליטר של PBS סטרילי לשטוף את המדיום שיורית. מוסיפים מיליליטר של טריפסין-EDTA לתוך צלחת התרבות בעדינות להטות את צלחת התרבות כדי לוודא כי המנה כולה מכוסה.לאחר הדגירה בטמפרטורת החדר במשך חמש דקות, מרווה את תגובת טריפסין-EDTA עם שלושה מיליליטר של מדיה DMEM. השתמש פיפט חמישה מיליליטר כדי לאסוף את התאים לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר, צנטריפוגה, ולאחר מכן תרבות התאים כמתואר בכתב היד. כדי להקרין תאים אלה שהוכנו בעבר באמצעות תוכנת המסוף של LINAC, הגדר את גנט המאיץ ואת הקולימאטור לאפס מעלות, פתח את לסתות x ו- y לגודל שדה סימטרי של חמישה על חמישה סנטימטרים רבועים, וחזור בו מהקולימטורים הרב-שלביים.מוסיפים לפחות חמישה סנטימטרים של חומר שווה ערך למים על ספת הטיפול וממקמים את צלחת התא להיות מוקרן על זה במרכז הכוונת LINAC. מניחים את התאים בעומק של מינון מרבי בקרן רנטגן של שישה מגה וולט סביב 1.5 ס"מ ומוסיפים סנטימטר נוסף של חומר שווה ערך למים על גבי המנה. הדביקו את המצביע הקדמי לראש ה-LINAC והרחיבו אותו עד שהוא נוגע בפני השטח של חומר ההצטברות.כוונן את גובה הטבלה עד שהמרחק מהמקור למשטח ההצטברות יהיה 100 ס"מ. לעזוב את כספת הטיפול, לוודא שכל האנשים האחרים עזבו. ודא שאין תאים אחרים בחדר ולאחר מכן סגור את דלת הכספת.אשר את גודל השדה, יחידות הצג ויחידות הצג לדקה במסוף ולאחר מכן הפעל את הקרן לתא קרינה. שלוש דגימות של תאים דמויי גזע גליומה הוכנו באמצעות פרוטוקול זה ואספו 24 שעות לאחר הקרנה. שם חושבו פרופילי מחזור תאים והוצג עם אחוזי התאים בשלבים שונים של מחזור התא.מעצר מחזור תא G2 נצפתה לאחר הקרנה של תאי גזע גליומה עם שיעור מינון סטנדרטי או שיעור מינון גבוה במיוחד, בהשוואה לתאי בקרה שאינם מוקרנים. על מנת לקבל את המינון הנכון נמסר, חשוב ביותר למדוד את הגובה של התקשורת בצלחת התרבות כדי לוודא שהוא מגיע סנטימטר אחד. בעקבות הליך זה, ניתן לבצע בדיקות ביולוגיות אחרות, כגון כשל חיסוני, כתם מערבי וניתוח מחזור תאים.מאז הליך זה מספק לחוקרים רלוונטי קלינית מינון והגדרות שיעור המינון, זה יכול לשמש כדי להעריך את השפעת הקרינה על מודלים מבוססי תרבות תאים רבים.

שימוש במאיץ ליניארי לניהול ניסויים רדיוביולוגיה ביולוגיה

Abstract