小鼠肝外胆管有机体的产生

胆管病变, 影响肝外胆管 (Ehbd), 包括胆道闭锁, 原发性硬化性胆管炎, 和胆管癌。他们没有有效的治疗选择。研究 EHBD 的工具非常有限。我们的目的是开发一种特定于器官、多才多艺的成人干细胞衍生的、临床前的胆管细胞模型, 该模型可从野生小鼠和基因工程小鼠中轻松生成。因此, 我们报告了从成年小鼠 Ehbd 中开发 EHBD 有机体 (EHBDO) 培养系统的新技术。该模型具有成本效益, 能够轻松进行分析, 并具有多个下游应用。具体而言, 我们描述了小鼠 EHBD 分离和单细胞离解、有机体培养的启动、繁殖以及长期维护和储存的方法。本文还介绍了 EHBDO 的免疫组织化学、荧光显微镜和 mRNA 丰度定量的实时定量逆转录聚合酶链反应 (qRT-PCR)。该协议除了生产 ehbd 特异性有机体外, 还具有显著的优势。使用来自 L-WRN 细胞的条件介质可显著降低该模型的成本。与人体组织不同, 小鼠 Ehbd 的使用为培养生成提供了几乎无限的组织。生成的小鼠 Ehbdo 含有纯群体的上皮细胞, 具有内皮祖细胞和分化胆道细胞的标记。培养的有机生物通过多个通道保持均匀形态, 并可在液氮长期储存后恢复。该模型允许研究胆道祖细胞增殖, 可以在药理上操纵, 也可以从基因工程小鼠中产生。需要进行进一步的研究, 以优化培养条件, 以提高电镀效率, 评估功能细胞成熟度, 并直接分化细胞。开发共培养模型和更中性的细胞外基质也是可取的。