הייצור של עמילואיד-β-הפרשה Alginate מיקרו חרוזי לשימוש ב דוגמנות מחלת אלצהיימר

על פי השערת העמילואיד, הגורם המוקדם ביותר בהתפתחות של מחלת אלצהיימר (AD) היא הצטברות של הβ עמילואיד רעילים (Aβ) שברי, בסופו של דבר מוביל את התכונות הקלאסיות של המחלה: הפלאק עמילואיד, מסבך נוירופיבריליאן והפסד עצבי. העדר של מודלים רלוונטיים טרום הטרנסגניים שאינם משקפים התקדמות המחלה הוא אחד הגורמים העיקריים מהווה את התגלית של טיפולים יעילים תרופות. לצורך זה, פיתחנו פרוטוקול לייצור של מיקרוחרוזים קילוף פלסטיצידיות המכילים הפרשה עמילואיד שימושי למחקר של ההשפעות של ייצור Aβ כרונית.

שחלות האוגר הסיני התאים בעבר מנוכר עם גן האדם APP, הפרשה Aβ (כלומר, 7PA2 תאים), שימשו במחקר זה. תלת מימדי (3D) מודל מבחנה עבור שחרורו מתמשכת של Aβ היה מפוברק על ידי עטיפת התאים 7PA2 ב alginate. התהליך היה ממוטב למקד קוטר חרוז של 500-600 יקרומטר להמשך במחקרים vivo. אופטימיזציה של מעטיפת התאים 7pa2 ב קילוף פלסטיצידיות בוצע שינוי הפרמטרים הייצור, למשל, קילוף פלסטיצידיות ריכוז, שיעור זרימת ג'ל, פוטנציאל אלקטרוסטטי, תדר הראש תנודות, פתרון ג'לי. רמות של Aβ מופרש נותחו לאורך זמן ולעומת חרוזים קילוף פלסטיצידיות ושיטות התרבות תאים סטנדרטיים (עד 96 h).

ריכוז של 1.5 x 10⁶ 7pa2 תאים/mL וריכוז קילוף פלסטיצידיות של 2% (w/v) באגירה עם hepes ובעקבות הגגנציה ב 0.5 M סידן כלוריד עבור 5 דקות נמצאו להמציא מיקרוחרוזים יציבים ביותר. מיקרוחרוזים מפוברק היו 1) של גודל אחיד, 2) עם קוטר ממוצע של 550 μm, 3) המכיל על 100-150 תאים לכל גרגרי ו 4) מסוגל להפריש Aβ.

לסיכום, השיטה האופטימיזציה שלנו לייצור מיקרוחרוזים יציבים קילוף פלסטיצידיות המכילים עמילואיד הפקת תאים 7pa2 עשוי לאפשר מידול של היבטים חשובים של AD הן מבחנה ובvivo.