Caratterizzazione delle proteine mediante cromatografia di dimensioni-esclusione accoppiata alla dispersione luminosa multi-angolo (SEC-MALS)

La cromatografia analitica di esclusione delle dimensioni (SEC), comunemente utilizzata per la determinazione del peso molecolare delle proteine e dei complessi proteina-proteina in soluzione, è una tecnica relativa che si basa sul volume di eluizione dell'analita per stimare le molecole molecolari peso. Quando la proteina non è globulare o subisce interazioni di colonna non ideali, la curva di calibrazione basata sugli standard proteici non è valida e il peso molecolare determinato dal volume di eluizione non è corretto. La dispersione della luce multi-angolo (MALS) è una tecnica assoluta che determina il peso molecolare di un analita in soluzione dalle equazioni fisiche di base. La combinazione di SEC per la separazione con MALS per l'analisi costituisce un mezzo versatile e affidabile per caratterizzare le soluzioni di una o più specie proteiche, tra cui monomeri, oligomeri nativi o aggregati ed eterocomplessi. Poiché la misurazione viene eseguita ad ogni volume di eluizione, SEC-MALS può determinare se un picco di elusione è omogeneo o eterogeneo e distinguere tra una distribuzione del peso molecolare fisso e un equilibrio dinamico. È anche possibile un'analisi di proteine modificate come glicoproteine o lipoproteine, o coniugati come proteine di membrana solubilita-detersivo. Quindi, SEC-MALS è uno strumento critico per il chimico proteico che deve confermare le proprietà biofisiche e il comportamento della soluzione delle molecole prodotte per la ricerca biologica o biotecnologica. Questo protocollo per SEC-MALS analizza il peso molecolare e le dimensioni dei monottri e aggregati di proteine pure. I dati acquisiti servono come base per ulteriori analisi SEC-MALS, tra cui quelle di complessi, glicoproteine e proteine a membrana legate ai surfactant.