Caracterização de proteínas por cromatografia de exclusão de tamanho acoplada ao espalhamento de luz Multiangulares (SEC-MALS)

A cromatografia de exclusão de tamanho analítico (SEC), comumente utilizada para a determinação do peso molecular de proteínas e complexos proteicos protéicos em solução, é uma técnica relativa que se baseia no volume de eluição do analito para estimar a Peso. Quando a proteína não é globular ou sofre interações não-ideais da coluna, a curva da calibração baseada em padrões da proteína é inválida, e o peso molecular determinado do volume da eluição é incorreto. O espalhamento de luz de vários ângulos (MALS) é uma técnica absoluta que determina o peso molecular de um analito em solução a partir de equações físicas básicas. A combinação de SEC para separação com MALS para análise constitui um meio versátil e confiável para caracterizar soluções de uma ou mais espécies de proteínas, incluindo monómeros, oligomeros nativos ou agregados, e heterocomplexos. Uma vez que a medição é realizada em cada volume de eluição, SEC-MALS pode determinar se um pico de eluição é homogêneo ou heterogêneo e distinguir entre uma distribuição de peso molecular fixo versus equilíbrio dinâmico. Também é possível a análise de proteínas modificadas, como glicoproteínas ou lipoproteínas, ou conjugados, como proteínas de membrana solubilizadas em detergente. Assim, a SEC-MALS é uma ferramenta crítica para o químico protéico que deve confirmar as propriedades biofísicas e o comportamento da solução de moléculas produzidas para pesquisa biológica ou biotecnológica. Este protocolo para SEC-MALS analisa o peso molecular e o tamanho de monômeros e agregados de proteínas puras. Os dados adquiridos servem como base para novas análises de SEC-MALS, incluindo as de complexos, glicoproteínas e proteínas de membrana acoplada a surfactante.