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  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Nós descrevemos uma pilha mononucleares do sangue periférico humano (PBMC)-modelo humanizado baseado do rato do xenograft para a pesquisa translacional do immuno-Oncology. Este protocolo poderia servir como diretriz geral para O estabelecimento e caracterização de modelos similares para a avaliação da terapia de I-O.

Abstract

A descoberta e desenvolvimento da terapia de imuno-Oncologia (I-O) nos últimos anos representa um marco no tratamento do câncer. No entanto, persistem desafios de tratamento. Modelos animais robustos e relevantes para a doença são recursos vitais para a continuação da investigação pré-clínica e do desenvolvimento, a fim de abordar uma série de pontos de verificação imunológicos adicionais. Aqui, nós descrevemos uma pilha mononucleares humana do sangue periférico (PBMC)-modelo humanizado baseado do xenograft. BGB-A317 (Tislelizumab), um anticorpo anti-PD-1 humanizado investigacional no desenvolvimento clínico em estágio tardio, é usado como exemplo para discutir a criação da plataforma, a caracterização do modelo e as avaliações da eficácia do fármaco. Estes ratos humanizados apoiam o crescimento da maioria dos tumores humanos testados, permitindo assim a avaliação de terapias de I-O no contexto da imunidade humana e dos cânceres humanos. Uma vez estabelecido, nosso modelo é comparativamente tempo-e custo-eficaz, e geralmente produzem resultados altamente reprodutíveis. Nós sugerimos que o protocolo esboçado neste artigo pudesse servir como uma diretriz geral para estabelecer os modelos do rato reconstituídos com O PBMC humano e os tumores para a pesquisa do I-O.

Introduction

A imuno-Oncologia (I-O) é um campo de tratamento de câncer em rápida expansão. Os pesquisadores começaram recentemente a apreciar o potencial terapêutico das funções moduladoras do sistema imunológico para atacar tumores. Bloqueios de ponto de verificação imunológico demonstraram atividades encorajadoras em uma variedade de tipos de câncer, incluindo melanoma, Carcinoma de células renais, cabeça e pescoço, pulmão, câncer de bexiga e próstata1,2. Ao contrário das terapias direcionadas que matam diretamente as células cancerosas, as terapias I-O potenciam o sistema imunológico do corpo para atacar os tumores

Protocol

Todos os procedimentos realizados em estudos envolvendo participantes humanos estavam de acordo com os padrões éticos do BeiGene e/ou Comitê Nacional de pesquisa e com a declaração de Helsínquia 1964 e suas emendas posteriores ou padrões éticos comparáveis. O consentimento informado foi obtido de todos os participantes individuais incluídos no estudo. Todos os procedimentos realizados em estudos envolvendo animais foram aprovados pelo Comitê de revisão interna do BeiGene. Este protocolo foi ajustado especific.......

Representative Results

Seguindo os procedimentos aqui apresentados, foi estabelecido com sucesso um modelo humanizado de Xenoenxerto com base em PBMC. Em síntese, os efeitos da mieloablação de PB nos camundongos NOD/SCID foram determinados pela análise de citometria de fluxo de populações de neutrófilos e monócitos pós-tratamento de CP e DS (Figura 1). 100 mg/kg CP mais 125 mg/kg DS foi determinada como a dose óptima e utilizada em estudos posteriores, uma como o regime resulta na depleção máxima de n.......

Discussion

Nosso conhecimento do desenvolvimento e da progressão do cancro avançou significativamente nos últimos anos, com foco em uma compreensão detalhada das pilhas do tumor e de seu estroma associado. Aproveitar os mecanismos imunes do hospedeiro poderia induzir um maior impacto contra as células cancerosas, representando uma estratégia de tratamento promissora. Os modelos murinos com sistemas imunológicos de rato intacto, como os modelos syngeneic e GEM, têm sido amplamente utilizados para estudar a imunidade mediada .......

Disclosures

Todos os autores têm o interesse da posse em BeiGene. Tong Zhang e Kang li são inventores em uma patente cobrindo BGB-A317 descrito neste estudo.

Acknowledgements

Agradecemos aos membros dos nossos laboratórios por discussões úteis. Este trabalho foi parcialmente apoiado pelo programa de pesquisa de inovação e cultivo biomédico e de Ciências da vida da Comissão Municipal de ciência e tecnologia de Pequim, o acordo de subvenção n º. Z151100003915070 (projeto "estudo pré-clínico sobre uma nova droga antitumoral de Oncologia imunológica BGB-A317"), e também foi parcialmente apoiado pelo financiamento interno da empresa para pesquisa pré-clínica.

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Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
PBMC separation /cell culture
Histopaque-1077Sigma10771Cell isolation
DMEMCorning10-013-CVRCell culture
DPBSCorning21-031-CVRCell culture
FBSCorning35-076-CVCell culture
Penicillin-Streptomycin, LiquidGibco15140-163Cell culture
Trypsin-EDTA (0.25%), phenol redGibco25200-114Cell culture
MatrigelCorning356237CDX inoculation
FACS analysis
Deoxyribonuclease I from bovine pancreasSigmaDN25Sample preparation
Collagenase Type ISigmaC0130Sample preparation
Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibodyBioLegend101206FACS
Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibodyBioLegend128008FACS
Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibodyBioLegend127614FACS
Anti-human CD8 (OKT8) antibodySungene BiotechH10082-11HFACS
Anti-human CD279 (MIH4) antibodyeBioscience12-9969-42FACS
Anti-human CD3 (HIT3a) antibody4A Biotech--FACS
Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow CytometerMillipore0500-4008FACS
Tumor/PDX implantation /dosing / measurement
CyclophosphamideJ&KCat#419656, CAS#6055-19-2In vivo efficacy
DisulfiramJ&KCat#591123, CAS#97-77-8In vivo efficacy
SyringeBD300841CDX inoculation
Hypodermic needles (14G)Shanghai SA Mediciall & Plastic Instruments Co., Ltd.0.7*32 TW SBPDX inoculation
Vernier Caliper (MarCal)Mahr16ERTumor measurement
IVC individual ventilated cagesLingyunboji Ltd.IVC-128Animal facility
IHC
Leica ASP200 Vacuum tissue processorLeicaASP200IHC
Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine SectioningLeicaRM2235IHC
Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding ModuleLeicaEG1150 HIHC
Ariol-Clinical IHC and FISH ScannerLeicaAriolIHC
Anti-human CD8 (EP334) antibodyZSGB-BioZA-0508IHC
Anti-human PD1 [NAT105] antibodyAbcamab52587IHC
Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibodyCell Signaling Technology13684SIHC
Polink-2 plus Polymer HRP Detection SystemZSGB-BioPV-9001/9002IHC

References

  1. Pardoll, D. M. The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy. Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).
  2. Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.

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